RNA探针如何稀释

RNA探针: RNA探针的长度以50-150碱基为佳，探针易进入细胞，杂交率高，杂交时间短.长500个碱基的探针杂交时间约需20个小时左右，如超过500个碱基的RNA探针则在杂交前用有限碱基水解法控制其长度.

　　(1)孵育时间t = Lf- Lo / K × Lo ×Lf (Lo=核酸探针原长度(kb)，Lf=核酸探针水解后所需长度(kb)，K是常数率=0.11kb/min).

　　(2)在室温中加入下列试剂终止水解:3mol/L醋酸钠，6.6μl(终浓度0.1mol/L)，醋酸1.3μl(终浓度为0.5%).

　　(3)加入下列试剂沉淀探针:7mol/L醋酸铵100μl，乙醇 750μl，RNA (10mg /ml) 2μl ，置 -20℃ 2 小时后恢复到室温，在1400rpm离心30min.

　　(4)小心将乙醇倒出，待试管内干燥后再用无菌ddH2O稀释到10ng/μl浓度.

　　(5)Z终探针长度可于10% 聚丙稀酰胺凝胶在60℃ 的尿素中电泳检测.