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GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些?

qxiaohong7 2012-05-21
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检测方法:
1、实验准备
 Modulus单管型多功能检测仪
 Blue荧光模块(P/N 9200-040)
 微量适配器(P/N 9200-928)
 纯化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.632502)
 200ul加样器与20ul加样器
 TE Buffer (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)
 1.5ml离心管
2、.仪器准备

2.1 关闭Modulus的电源,为Modulus插入BLUE荧光检测模块.
2.2 打开Modulus的电源,仪器预热1min
2.3 按照说明插入微量适配器

3.、制备标准曲线

3.1 对rAcGFP1进行系列稀释
3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意:避免在微量比色杯中出现气泡,负责会引起检测误差。.
3.3 将微量比色杯插入到微量适配器中,点"Measure Fluorescence Raw."检测
3.4 记录检测结果,对其他样品重复4.2-4.3的步骤
3.5 利用荧光值(FSU)与样品浓度做出标准曲线

4、 校准

4.1 使用Modulus检测未知样品前,你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪器
4.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择"ng/µL"作为测量单位,使用0 ng/µL 作为空白标准;为了尽可能准确,使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。
4.3 保存校准,可供以后调用 (可选).
4.4 使用"Measure Fluorescence."开始检测未知样品。注意:在校准后就无需再做标准曲线。
4.5 样品浓度将直接在屏幕上显示.

简介:
绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)是一类存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋白质颗粒荧光都呈绿色,因此,人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。
GFP具有多种优点:易于检测,灵敏度高;荧光性质稳定,耐受性强;易于表达,无细胞毒性;可用于活细胞检测。因此,GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控,或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用,或者靶向标记某些细胞器
4 0 2016-11-27 0条评论 回复
zbabyxl0
我知道的,目前有两种:1.荧光光度计,2.流式细胞仪。详细步骤可查阅文献
6 0 2012-05-26 0条评论 回复
青田青青
1.荧光显微镜下观察GFP的绿色荧光;
2.利用GFP的抗体,western blot 可以检测有无GFP蛋白
11 0 2015-09-10 0条评论 回复
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