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如何应用流式细胞仪检测荧光蛋白的表达量?

我爱酸奶nimei 2010-03-08
请各位前辈指教:想要通过检测EGFP的表达量知道与其融合表达的基因的表达情况。是否可以应用流式细胞仪完成?上流式细胞仪之前对细胞应该做什么样的处理?
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kookkw12
可以。这个是流式细胞仪一个常见的应用。

上流式细胞仪以前,需注意的是
1。细胞打散到单细胞的悬液,没有聚团成块。如果有顾虑的话用纱网过滤一次才用。
2。细胞悬液的浓度不能过高和过低。详请参考你的仪器说明建议值。我的经验每毫升一百万足足够了。少些读取慢些也没有大问题,一支样品少过十万的话,就很容易得不到足够的数据。太多则读取过快,准确性可能降低,更多更危险,可能造成仪器管道堵塞。
3。如果上机时间能保证,细胞直接打散均匀在PBS里面就可以上机了,除了贴壁细胞需要的胰酶处理按照普通传代步骤来做,之后洗一次,没有什么其他处理。如果细胞悬液制好后可能需要等待(超过半小时),则用1-2%多聚甲醛或溶液保存细胞。注意避光避免丢失荧光信号。这样保存放4度冰箱一两个礼拜之后也还是可以上机,误差不大。
11 0 2016-12-01 0条评论 回复
muselove8
把你的细胞消化成单细胞悬液,通过流式细胞仪检测荧光强度就可以了。
需要准备没有荧光的细胞作为对照。
7 0 2010-03-09 0条评论 回复
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