转染 后用荧光显微镜观察细胞是否有荧光出现 在

我Z近常做这个实验，GFP也在N端，与目的蛋白融合表达，我对COS-1转染该融合片段的感想总结如下：
1）转染细胞状态一定要好，这是成败的关键。我选择的是早晨消化COS，分瓶密度高，下午即在60%满时，就转染1-2ugDNA，6hr换液用低血清（1%FBS）DMEM维持
2）GFP-目的蛋白由于CMV启动子问题，表达效率太高，对细胞的正常状态不利，尤其是细胞状态不好的细胞。所以常有细胞漂浮起来、凋亡的现象，看荧光时，可以将细胞上清洗涤后观察。
3）根据不同蛋白的性质决定的，有的蛋白具有NES、NLS或跨膜区、信号肽等功能性序列，可能将GFP带到胞外
4）细胞的性质决定GFP位置：如COS细胞，常形成液泡，占据大量胞浆，GFP有时会沿着这种胞液分布，要选择高倍镜观察
5）观察要仔细，选择可见光和高倍数荧光看
祝您成功！