蛋白磷酸化的位点确定方法，质谱有什么缺点？

鉴定了磷酸化肽后，还要进一步确定磷酸化肽中修饰了磷酸化位点的哪个残基。用于确定磷酸化肽中磷酸化位点的质谱方法基于两种不同原理，diyi种方法取决于磷酸酯键的化学稳定性，如在ESI质谱仪的碰撞室或离子源中，或在MALDI-MS的PSD过程中。磷酸化肽可通过磷酸酯键断裂产生的碎片离子鉴定。第二种方法基于肽段增加的磷酸酯基团的质量数。假如蛋白是已知的，可通过质量数来确定肽段。在某些情况下，肽段只含有一个丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，则很轻易找到磷酸化位点，但在大多数情况下肽段含有很多个丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸残基，则确定磷酸化位点发生困难。