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怎么检验饮料中的大肠杆菌??

link0yuo 2010-01-17
请把检验的步骤、药品、器材,尤其是该配个什么样的培养基?急用!!!请大家帮忙
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轩轩love莹莹
样品制备:
以无菌操作取25 g样品,放入装有225 mL稀释剂的灭菌均质杯内,于8000 r/min均质1~2min,制成1:10样品匀液(也可用灭菌乳钵研磨的方法代替)。
稀释样品匀液根据对样品污染情况的估计,用稀释剂将样品匀液制成一系列十倍递增的样品稀释液,如10**-2、10**-3、10**-4……。从制备样品匀液至稀释完毕,全过程不得超过15min。

附:这是一种9管MPN法测定方法.

LST和EC初步筛选:
对每个样品,选择适宜的三个连续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白(月示)(LST)肉汤,每管接种1mL。将接种管置于36±1℃培养48±2h。

观察试管的产气情况:检查倒管内是否有气泡产生,用直径为3mm的接种环将所有48±2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。将所有接种的EC肉汤管在30min内放入带盖44.5±0.5℃水浴箱内,培养48±2h。

EMB平板:

取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板,36±1℃培养24±2h。

检查平板上有无具黑色ZX有光泽或无光泽的典型菌落。

如有典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个典型菌落;如无典型菌落,则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落ZX部位,移种到营养琼脂斜面上,36±1℃培养18~24h。

平板划线示例

EMB平板原理及照片

生化试验:
将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。
1 色氨酸肉汤:在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2~0.3mL,上层出现红色为靛基质阳性反应。

2 MR-VP培养基:在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL至13mm×100mm试管中,加5%α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40%氢氧化钾溶液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验阳性。
将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。

3 Koser氏枸椽酸盐肉汤:于36±1℃培养96h记录有无生长。

4 LST肉汤:于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。
5 革兰氏染色:取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革兰氏阴性。

大肠杆菌与非大肠杆菌生化鉴别如下:

━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━┳━━━━━━━━━
靛 基 质┃ MR ┃ VP ┃ 枸椽酸盐 ┃ 鉴定(型别)
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+ ┃ + ┃ - ┃ - ┃典型大肠杆菌
- ┃ + ┃ - ┃ - ┃非典型大肠杆菌
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
+ ┃ + ┃ - ┃ + ┃典型中间型
- ┃ + ┃ - ┃ + ┃非典型中间型
━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━╋━━━━━━━━━
- ┃ - ┃ + ┃ + ┃典型产气肠杆菌
+ ┃ - ┃ + ┃ + ┃非典型产气肠杆菌
━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━┻━━━━━━━━━
如出现上表以外的生化反应类型,表明培养物可能不纯,应重新划线分离,必要时做
重复试验。

结果报告:

大肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌,发酵乳糖产酸产气,IMViC试验为++
--或-+--,再根据LST肉汤阳性管数查MPN表,报告每克(毫升)样品中大肠杆菌MPN
值。

希望能帮到你
5 0 2010-01-18 0条评论 回复
丶暖心冰帝
刘小拓讲的基本是药典上的专业检测方法。如果你有各种菌体的显微照片及扎实的显微检测经验可用计数板进行显微计数,但请注意计数所的值是活菌体与死菌体的总和,该法仅适用快速检测。
17 0 2010-01-18 0条评论 回复
融雪白梅
这个实验我做过!我帮你找找我当时的试验报告看看!不过,我们当时做的时候很粗虐!因为饮料中基本上是没有大肠杆菌的,所以当时没有看到大肠杆菌菌落就没做了~!希望对你有用~
15 0 2010-01-24 0条评论 回复
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