bradford法测定蛋白质含量的优点有哪些

Bradford法测定蛋白质浓度
（一）实验原理
双缩脲法（Biuret法）和Folin—酚试剂法（Lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋
白质溶液测定的方法.
1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法（Bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的.这种蛋白
质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用.这一方法是目前灵敏度Z高的蛋白质测定
法.
考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的Z大吸收峰的位置（max），由465nm变为595n
m，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色.
在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比.
Bradford法的突出优点是：
（1）灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其Z低蛋白质检测量可达1g.这是因为蛋白质与染料结合后产生
的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的
多.
（2）测定快速、简便，只需加一种试剂.完成一个样品的测定，只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的
大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性Z好.
因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.
（3）干扰物质少.如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不
干扰此测定法.