如何理解样品制备过程中蛋白质分离，提取和纯化?

蛋白质样品的制备主要包括分离和纯化两大步骤。前者是从生物体中提取出蛋白质，后者是提纯某一种目标蛋白。

1 蛋白质带有电荷，是两性分子，因此能够在电场中运动，因此能够电泳。

2 双向电泳中的diyi向（等电聚焦）利用了蛋白质在不同pH值下带有不同的电荷，从而可以在等电聚焦中停止在蛋白分子不带电的pH值带上。而第二项(SDS-PAGE)则是利用不同大小的蛋白质在PAGE胶中泳动速率不同，即通过蛋白质分子量大小来区分。

3 聚丙烯凝胶电泳的基本原理是蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中，可因为自身大小缘故在凝胶的孔洞中运动，越大的蛋白受到的阻力越大，因此泳动越慢，从而分离蛋白。SDS的作用是变性蛋白，并中和电性，使得蛋白质的泳动速率只决定于其分子量大小。

一种分子放置在电场中，他就会以一定的速度移向适当的电极。所以呢，根据蛋白质分子的大小、构型、形状、所带净电荷，就可以通过电泳将其混合物种不同组分给分离开来。PAGE中因浓度不同会形成大小不等的孔隙，可以让不同的分子在电场作用下穿过其中。浓度不同，孔隙大小不同，能穿过的分子也不同，一定时间的电场作用下穿过的距离也不一样。

SDS是十二烷基硫酸钠，其是常用的蛋白质的变性剂，可以中和电性，使蛋白质的泳动速率只取决于分子的大小~