【 操作步骤】
1. 点样 将醋酸纤维薄膜 (2.5cm×8cm) 一条,浸于缓冲液,待完全浸透后,取出轻轻夹于滤纸中,吸去多余的溶液,再于薄膜的无光泽面的一端 2.0cm 处,用小玻片蘸取少许血清,垂直印于膜上,待血清渗入薄膜后,以无光泽面向下,两端用数层浸湿的滤纸 ( 或纱布 ) 贴紧,加盖,平衡 2 ~ 3min ,然后通电。
2. 通电 一般电压用 110 ~ 140V ,电流约 0.4 ~ 0.6mA / cm ,时间 45 ~ 60min 。
3. 染色 关闭电源后立即将膜取出,放入染色液中浸染 2 ~ 3min ,然后移入漂洗液中漂洗数次,至蛋白条带清晰,背景无色为止。
4. 定量 取试管 6 支,编号依次为 0 (空白)、 A 、 α1 、 α2 、 β 、 γ ,将电泳图谱亦按 A 、 α1 、 α2 、 β 、 γ 蛋白区带剪开,分别装入相应号码试管中。再在图谱两端无蛋白部位剪一条宽约 α1 带的空白带放入空白管中。各管中加 0.4mol/L NaOH 4ml ,振摇数次,使染料色泽浸出, 30min 后,在 620nm 波长下进行比色,以空白管校正零点,读取清蛋白及 α1 、 α2 、 β 及 γ 球蛋白各管的吸光度。