细菌鉴定(玻片法)用图表示

细菌的鉴定

通过分离培养获得的病原菌，必须达到不含有其他微生物的纯培养程度，才能进行系统鉴定。系统鉴定就是通过病原菌的形态结构、生长特性、抗原性和病原性等检测，并用已知标准免疫血清确定分离细菌的属、种和型。微生物鉴定的程序通常是根据其形态，生长、生化特性等定种，Z后根据抗原的免疫血清学检查定型。

(一) 形态学检查　各种细菌的形态，在适宜的环境下是相对稳定的。但环境的改变，如培养基条件的改变，抗生素和化学药品的作用等，均可使细菌产生不规则的形态，并可出现细胞壁的缺陷和多样性。为此，在作细菌形态鉴定时，必须按被检菌的生长要求，选择适宜的培养基和培养条件，以及适宜的培养时间和检查方法，才能作出正确的形态学鉴定。形态学检查一般包括二方面：肉眼观察和显微镜检查。

1. 肉眼观察　肉眼观察主要观察细菌在固体、液体、半固体，鉴别培养基上的生长情况。在固体培养基上要观察菌落形态、大小、颜色是否均匀一致，表面是光滑湿润，还是干燥无光或呈皱纹状，边缘是整齐还是不规则，菌落是隆起、扁平，还是乳头样，是透明、半透明或不透明。在液体培养基中，要观察培养基是否呈均匀浑浊，管底有无沉淀，液面有无菌膜，是否产气等。在半固体培养基上应观察细菌是否沿着接种线生长，是呈毛刷样生长还是均匀生长，上下生长是否一致。在鉴别培养基上，应观察其生长情况是否与预期的相一致，在血琼脂培养基上还要观察是否溶血及溶血圈的特点，在某些培养基上还要注意是否有臭味等。

2. 显微镜观察　在作细菌个体形态学检查时，要根据被检菌的种类和检查项目，选用相应的染色方法，同时要注意选择适合的培养基以及细菌培养的时间，才能达到预期的目的。一般以18－24小时（生长时间长的细菌除外）的幼嫩培养菌为宜。例如，作革兰氏染色检查时，培养时间长的陈旧细菌，可能由阳性变为阴性。作细菌运动性检查时，液体培养基的幼嫩培养物（几小时到十几小时）Z为适宜。作炭疽荚膜染色时，因炭疽杆菌在一般培养基上不形成荚膜，而在动物体内形成明显的荚膜，因此，应先接种小鼠，取死亡动物的病料作涂片标本镜检。作鞭毛染色时，以液体培养基为宜。芽胞的形成，因细菌种类不同，往往对培养条件如培养基、空气和培养时间等而异，但一般均要求较长时间。镜检时除注意其基本形态结构和大小（要用测微计测量）外，还应注意其排列状态、菌端形状、有无两极染色、有无形成芽胞和荚胞等。必要时可用电镜观察其微细结构。

3. 常用的几种染色方法　涂片用的载玻片需用清洁液洗净、擦干、不留油质，否则培养物不能均匀地推开。被检材料如果是肉汤培养物，用铂金耳环取一滴，均匀涂抹于载玻片上，涂抹的范围约有手指甲大即可。随后，在酒精灯火焰上加热使之固定（即火焰固定）；被检材料如果是固体培养物，先滴一滴水（常用生理盐水）于载玻片上，用铂金耳环取少许培养物，在水滴中混匀，培养物不宜太多，菌体看不清楚。脓汁、淋巴液、乳汁也按同样方法制备抹片。血液和病变组织，直接涂抹在载玻片上，组织抹片也不能太厚，否则看不见细菌，细菌培养物抹片用火焰固定，组织抹片常用甲醇或甲醛固定。