仪器资讯
实验方法原理
运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
实验材料：
脐带
试剂、试剂盒
胶原酶消化液胰蛋白酶胶原酶弹性蛋白酶DMEM
仪器、耗材
眼科剪滴管离心机培养皿CO2培养箱
实验步骤
一、实验步骤
1.冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片。
2.用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10次。
3.加入10倍体积无菌胶原酶消化液(1mg/mL)，室温消化30min，1000rpm离心5min，弃上清，加1mg/mL胰蛋白酶37℃消化20min，再次离心5min，弃上清。
4.加入胰蛋白酶37℃消化20min，再次离心5min，弃上清。
5.加胶原酶(1mg/mL)弹性蛋白酶(0.5mg/mL)混合消化液37℃消化20min，再离心5min，弃消化液。
6.加混合消化液37℃消化20min，再次离心5min，细胞加含10%FBS的DMEM培养基重悬，转入培养皿37℃、5%CO2培养箱中培养即可。
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