检定/校准可见分光光度计不容忽视的点

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检定/校准可见分光光度计不容忽视的点

可见分光光度计是化学分析中常用的计量器具，它的准确与否直接关系到测量数据的可靠真实。所以检定/校准的准确是计量工作中的ZD。本文针对可见分光光度计的检定/校准应关注的点进行论述。

可见分光光度计是一种结构简洁、使用方便的单光束分光光度计，分析测量的原理是基于郎伯-比尔定律，利用样品对单色光的选择吸收特性来测量和记录其吸收程度（吸光度），对样品进行定性和定量分析。其原理是：当一束单色光照射待测物质的溶液时，当某一定频率（或波长）的可见光所具有的能级差相适应（即△E=E2-E1=hf）时，待测物将对该频率（波长）的可见光产生选择性吸收。用可见分光光度计可以测量和记录其吸收程度（吸光度）。由于在一定的条件下，吸光度 A与待测物质的浓度 C及吸收池长度 L的乘积成正比，即 A=KCL，所以，在测得吸光度 A 后，可采用标准曲线法、比较法以及标准加入法等方法进行定量分析。由上可知在实际的检定/校准过程中，关系到可见分光光度准确度主要有其波长、配套的比色皿及用于检测的计量标准器，关注这三个点对可见分光光度计的准确判定起到事半功倍的作用.

（1）可见分光光度计的波长。检定/校准前对可见分光光度计的光路进行检查。在排除了实验室环境条件差，如磁光度计的光路进行检查。在排除了实验室环境条件差，如磁路容易造成光路故障等因素，将其波长置于 580nm处，狭缝置于 2nm范围以内，用白色的滤纸置于光路中，观察光斑的颜色，来将波长大致调整至接近准确的范围内。波长调整后，按照规程的要求对波长进行检定，当发现波长超差时，可继续调整波长，直至检测数据符合要求。

（2）要重视对比色皿成套性的检定。在可见分光光度计的检定/校准中，我们往往重视对其本身的检定，而容易忽视对配套使用的比色皿成套性的检定，这也是造成仪器分析结果偏离或超差的一个重要因素。很多可见分光光度操作人员由于对结构及分析原理了解不够，也容易忽视这一问题,从郎伯-比尔定律公式中不难看出，如果比色皿杯子的尺寸以及透光性发生变化，将直接影响检测结果的准确性。在检定/校准中，有时会遇到用户反映检测结果有问题，怀疑是仪器波长超差，但到现场经我们认真反复对仪器进行检定后，发现仪器各项技术指标没有大的问题，基本符合规程的要求，再检查溶液的配制，也没有发现较大的问题，Z后发现配套使用的两个比色皿杯，从外观上看颜色深浅不一致，经检定后发现两个比色皿示值误差在 10%左右，严重超差。经询问得知，造成这两个杯子颜色不一致的原因是：操作人员习惯做法是盛放参比溶液与盛放样品溶液的比色皿长期固定不变且不注意及时清洗，因而造成盛放样品溶液的比色皿杯由于污染程度相对严重而使比色皿表面颜色变深，久而久之，两个比色皿透射比出现较大的误差。针对这一情况，我们告诉操作人员，配套使用盛放参比液比色皿与盛放样品溶液的

比色皿不是固定不变的，可以互换使用，但必须保持清洁，用完后应及时用蒸馏水作参比检查其成套性，其误差不应超过 0.5%，这一点在规程上是有明确规定的，另外，比色皿透光面如遭到污染，应使用蒸馏水缓缓冲洗，然后再用洁净而干燥的细布或专用镜头纸轻轻擦净，Z好不要用毛刷或滤纸等硬性物质擦试，以免出现划痕，造成比色皿报废，使用完毕后，一定要及时给予清洗。清洗时，可用微量浓度的酸或一定浓度有机溶剂浸泡清洗，然后用蒸馏水冲洗，Z后应在干净的环境中风干，切勿用热风烘烤吹干，以免使吸收池形状、尺寸发生微小变化，因而影响光程直至检测结果。

（3）我们检定使用的主标准器为滤光片，争取得到更多的信息，以便灵活使用。在检定中，遇到的大多数是进口仪器，自动化程度高，对仪器设定好使用条件，让操作人员按部就班地操作，不允许随意改变设定条件，以免仪器出现故障，但有时会给我们检定工作带来一定的困难，如何在这

种情况下进行检定工作，就需要我们灵活地使用检定规程。

比如在检定中，参考结果经常是吸光度值而不是透射比值，而我们的规程和主标准器的检定证书按常规给出的值却是透射比值，这就为工作带来不便。虽然二者之间可以互相换算，但在现场检定中，为了更快、更便捷地了解仪器，我们的计量标准在上级部门检定时，如果能在给出透射比标准值的同时再给出吸光度标准值更好。

结语

可见分光光度计属于实验室常用计量仪器的一种，按国家检定规程应定期检定，进行量值溯源。只有熟练地操作仪器，定期检定，才能确保仪器波长的准确度，从而才能保证测定的准确性，同时还能及时发现仪器存在的问题。

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2004-08-09