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植物基因组DNA的RFLP

植物基因组DNA的RFLP实验原理

DNA多态性是指DNA碱基顺序的差异性。这种差异性不仅存在于不同的植物之间,也存在于同一种植物的不同个体之间。RFLP多态性是指DNA限制性内切酶酶切片段长度的多态性(restnictionfragmentlengtholymophorphism)。由于碱基顺序的差异,在不同的种或同一个种的不同个体之间,它们的基因组DNA限制性内切酶位点的种类和数目不同,经特定的限制性内切酶切割后,所产生的限制性酶切片段在大小(长度)和数目方面自然也存在着差异。通过琼脂糖凝胶电泳分离和溴化乙锭染色,在紫外检测仪下观察,即可直接看到这种差异。电泳分离后,通过Southern杂交也可显示出已知DN**段的差异。

实验试剂

1.限制性内切酶

2.10×限制性内切酶缓冲液

3.0.5MEDTA(pH8.0)

4.溴化乙锭

5.琼脂糖

实验设备

1.电泳仪和电泳槽

2.微量离心管

3.低温冰箱

4.37℃水浴锅

实验材料

从不同植物或同一植物不同个体分离出的基因组DNA。

实验步骤

1.限制性内切酶酶切

  1)将在-20℃冷冻的DNA在冰上融化。

  2)取8支微量离心管按下表所示作好标记,并依次加入所需成分。

 

品种I

品种II

品种I-1

品种II-2

单酶切1#

双酶切2#

单酶切3#

双酶切4#

单酶切5#

双酶切6#

单酶切7#

双酶切8#

DNA

10

10

10

10

10

10

10

10

10×缓冲液

2

2

2

2

2

2

2

2

EcoRI

 

1

1

1

1

1

1

1

HindIII

 

1

 

1

 

1

 

1

无菌水

7

6

7

6

7

6

7

6

总体积(ul)

20

20

20

20

20

20

20

20

  3)混匀,慢速离心2秒,使溶液全部聚于管底。

  4)37℃保温2-3小时。

  5)加入1/10体积的0.5MEDTA溶液终止反应。

2.琼脂糖凝胶电泳分析

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2004-07-25
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