原代细胞注意的这些检测要点;
1)仔细阅读说明书确定试剂盒在有效期内,按说明书确定所有试剂齐全,以及所有实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等。
2)标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份,短期内无法实验者,注意低温保存。
3)按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂,选择抗体时Z好选择一个单抗和一个多抗进行配对;若选择两个单抗,必须识别不同表位的抗体;Z好从同一家公司选择抗体。
4)一般待测抗原标准曲线的线性范围的可通过将标准品做8次2倍系列稀释从2000pg/ml到15pg/ml,可利用标准的操作流程、放大试剂盒、第三类试剂、或改变酶底物系统可在一定范围内提高灵敏度。
操作步骤如下:
1、将特异性抗体与固相载体连接,形成固相抗体:洗涤除去未结合的抗体及杂质。
2、加受检标本:使之与固相抗体接触反应一段时间,让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合,形成固相抗原复合物。
3、洗涤除去其他未结合的物质。
4、加酶标抗体:使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。
5、此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。
6、加底物:夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。
7、根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。
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