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原代细胞传代技术

深度解析


1.选用原代细胞生长状态好(90-95%),生长数量大于5×105进行传代。

2.吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS(pH7.4)清洗细胞培养瓶2次。

3.1ml细胞消化液加入细胞培养瓶,轻轻摇动,使细胞消化液覆细胞培养瓶底。

4.细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养数分钟后,在显微镜下观察原代细胞的消化状态。

请记住:如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后,用手指轻轻拍打细胞培养侧部或底部至大部分贴壁细胞悬浮,加入细胞终止液,终止细胞消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。

5.吹打培养瓶中悬浮细胞若干次,再吸出细胞悬浮液,转入15ml离心管中,1000rpm离心5分钟。

6.弃离心管中液体,加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数,确定细胞数量。

细胞分瓶后,加入适量原代细胞培养液至细胞培养瓶中,置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。



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2004-09-17
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