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胃上皮细胞培养|实验技术服务

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pCzn1质粒+ArcticExpress宿主菌低温表达体系。
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测序实验流程:
一、背景介绍:
实验材料:
1.动物胎体胃黏膜,胃溃疡或胃癌手术切除的正常胃黏膜组织
2.1%Ⅳ胶原蛋白或1%明胶铺培养瓶,4℃冰箱内,使用前在37℃培养箱内放置2h,然后用培养液浸洗1次。
3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素,pH7.4
4.250000U/LⅠ型胶原酶或125000U/LⅠ型胶原酶和0.5%透明质酸酶,DMEM配置
5.解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊
6.离心管(15ml、50ml)
实验方法:
1.取妊娠19-21d胚胎大鼠,切开腹壁,取胃底部黏膜组织,放入预冷的PBS中,然后冲洗3次。
2.在解剖显微镜下,用眼科镊仔细剥除黏膜固有层。将黏膜上皮组织剪成1mm3左右的小块。
3.将组织块放入消化液中,在37℃条件下消化1-3h。然后,加入含血清培养液,终止消化。
4.用200目不锈钢筛网滤出组织块,收集滤液,离心(1500r/min,5min)。用PBS洗涤2次。
5.离心后,吸去上清液,加入培养液,混悬沉淀细胞。将细胞悬液加入培养皿或培养瓶中,放入37℃,含5%CO2的孵箱中培养24h。
6.吸去培养液,用PBS浸洗。然后,加入培养液,继续培养。以后每隔2-3d换液1次。
保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜原代细胞,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。


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2004-12-05
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