C反应蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）

深度解析

C反应蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）
（德国DRG原装进口货号EIA4584规格96T）
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实验原理
包被板上包被有抗CRP抗体，与稀释标准品和样本一起孵育，孵育中，CRP特异性结合包被抗体，洗板除去未结合的血清蛋白，抗原-抗体混合物与过氧化物酶酶联物抗体反应，洗涤除去为结合酶联物，加入含有TMB和过氧化氢的着色液孵育，与微孔板结合的免疫复合物的量与颜色强度成正比，加0.5M硫酸终止反应，450nm处检测吸光值
以标准品浓度和OD值做标准曲线，样本CRP浓度可直接从标准曲线上得出
此试剂盒在美国仅用于科研

试剂盒组成

包被板，96孔，包被有抗人CRP单克隆抗体标准品，5瓶，0.2ml，含1/10的预稀释标准品，浓度为：0；0.4；1；5；10ug/ml酶联物，1瓶，12ml，含过氧化物标记的抗人CRP单抗；KJ剂和惰性红色染料样本稀释液，1瓶，40ml，5X浓缩，含0.09%NaN3和KJ剂，惰性绿色染料洗涤液，1瓶，50ml，20X浓缩，含磷酸缓冲洗涤液底物液，1瓶，15ml，含过氧化氢和TMB终止液，1瓶，12ml，0.5M硫酸

实验所需材料但试剂盒未提供

精确移液器和枪头标准容积的洁净玻璃器皿样本稀释用的洁净玻璃试管酶标仪（450nm）

贮存条件
2-8℃

将微孔板条贮存于原装含干燥剂的密封袋内，直至全部用完不要使用过期的试剂

样本采集与准备
此实验可用到血清和血浆
采样后立即分离出血清，避免使用溶血，脂血或黄疸血，可能回导致错误结果
将血清转移干净试管
样本可在2-8℃下贮存几天，或冻存更长时间，避免反复冻融

一般注意事项
1使用一次性加样枪头加样，避免交叉污染．
2实验前，将所有试剂平衡至室温．试剂混匀时避免产生气泡．
3一旦实验开始，所有实验步骤应中断进行
4吸光值是孵育时间和温度的一条函数．所以应控制好实验加样，建议每次只做20份样品和一组标准品，作双份检测．

试剂准备

洗涤液：用去离子水稀释50ml的洗涤浓缩液至总体积为1000ml，稀释洗涤液可在2-8℃下至少放置1个月

过高温度可能回引起浓缩洗涤液出现浑浊，其并不会有影响，稀释后就会变澄清

样本稀释液：用去离子水稀释40ml的样本稀释浓缩液至总体积为200ml，2-8℃下可放置3个月或更长时间，始终保持澄清

实验步骤

10倍预稀释标准品血清按如下方法进行1:100稀释：

10ul的标准品至稀释试管内，加990ul的已稀释的样本稀释液，混合

样本按1:1000分两步进行稀释：10ul的样本血清与990ul的已稀释的样本稀释液，混合；加450ul的已稀释的样本稀释液与50ul的100X的预稀释样本，混合（注意：稀释样本贮存不要超过8小时）将100ul的稀释标准品和样本加入相应微孔内室温下盖板孵育30±2min洗涤缓冲液洗板3次

可选用合适的自动洗板机洗板，或手动洗板：迅速倒到孔内反应液，再注入稀释洗涤液．第三次洗板时，让稀释洗涤液在微孔内停留2－3分钟．每次洗板都要换新的稀释洗涤液．Z后倒掉所有溶液并在吸水纸上拍干，去除残留液滴．

每孔加100ul的酶联物，盖板室温下孵育30±2min重复步骤5）洗板每孔加100ul的底物液避光，室温下孵育10±2min每孔加50ul的终止液加入终止液后，30min内450nm处酶标仪上读数

结果分析与说明
以标准品的吸光度均值与相应的浓度建立Zyou标准曲线．
患者样品的浓度通过测的吸光值直接从标准曲线计算出浓度．
根据经验或可利用的计算机方法，也可用其它数据简化分析．
Zdi检测浓度
Zdi检测浓度约为0.02g/ml.

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2004-11-24