人脑源性神经营养因子（BDNF）酶联免疫检测试剂盒

深度解析

使用说明书是基于双抗体夹心技术原理，来检测人脑源性神经营养因子（BDNF），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。检测范围：0.5μg/L→15μg/L规格：96T/盒用途：用于人组织及相关液体样本中脑源性神经营养因子（BDNF）的测定。工作原理本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人脑源性神经营养因子（BDNF）的水平。向预先包被了人脑源性神经营养因子（BDNF）单克隆抗体的酶标孔中加入脑源性神经营养因子（BDNF），温育；洗涤后，加入HRP标记过的脑源性神经营养因子（BDNF）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。颜色的深浅与样品中人脑源性神经营养因子（BDNF）的浓度呈正相关。组成1标准品（24μg/L）0.5ml7显色剂A液6ml2标准品稀释液3ml8显色剂B液6ml3酶标包被板12孔×8条9终止液6ml4酶标试剂6ml10说明书1份530倍浓缩洗涤液20ml11封板膜2张6样品稀释液6ml12密封袋1个需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.7℃恒温箱3.一次性试管4.吸水纸5.精密移液器及一次性吸头6.蒸馏水注意事项:从2-8℃取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请Z后乘以总稀释倍数（×n×5）。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法1.自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。2.手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。标本要求1.不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。操作程序1.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：2.12μg/L（5号标准品）120μl的原倍标准品加入120μl的标准品稀释液3.6μg/L（4号标准品）120μl的5号标准品加入120μl的标准品稀释液4.3μg/L（3号标准品）120μl的4号标准品加入120μl的标准品稀释液5.1.5μg/L（2号标准品）120μl的3号标准品加入120μl的标准品稀释液6.0.75μg/L（1号标准品）120μl的2号标准品加入120μl的标准品稀释液7.分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品Z终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。8.弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。9.每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟。10.弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。11.每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。12.取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。操作程序总结：1.准备试剂，样品和标准品2.加入准备好的样品和标准品，37℃反应30分钟3.洗板5次，加入酶标试剂，37℃反应30分钟4.洗板5次，加入显色液A、B，37℃显色10分钟5.加入终止液15分钟之内读OD值,计算保存:2-8℃有效期:6个月。

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2004-11-23