IHC的标准化和自动化 免疫组织化学技术作为病理诊断的重要辅助手段，已成为目前临床组织病理诊断不可或缺的手段之一。免疫组织化学技术的应用大大提高了病理诊断的水平，使原来很多很难诊断的疾病，通过免疫组织化学技术的发展而得以解决。如对于形态上不典型、又无色素的恶性黑色素瘤HMB45、MelaA或S-100的IHC染色，可很容易帮助病理医生确定诊断。很多软组织肉瘤没有IHC的辅助很难确定其来源或分化方向。恶性淋巴瘤的诊断更是随着免疫组织化学技术的开展和不断进展而不断改进分类，认识其本质，确定病理类型和标准。免疫组织化学染色还可协助疾病的预后判断和具有指导临床ZL的作用。例如c-erbB-2强阳性（+++）提示肿瘤的预后差，发生转移的概率大，亦可提示临床使用Herceptin进行ZL。因此，可以说目前的临床病理诊断已离不开免疫组织化学技术，而没有免疫组织化学技术亦很难说有现代的临床诊断病理学。另外，随着法制观念的普及和增强，患者的法律意识和维权意识亦不断增强，分子病理学的飞速发展也在给我们带来方便的同时，使得标准化的问题变得更为迫切。综上所述各个方面都在要求我们的各项工作要标准化，要有严格的质量控制和高度的自动化。世界各国都正在探讨如何建立合理的免疫组织化学质量标准和实行一定范围内的质量控制，并取得了一定的成绩。 现代化的病理科实验室对效率、成本、效益、质量和结果重复性等方面的要求愈来愈高，解决方案就是IHC试剂的标准化和染色的自动化。IHC所用抗体是Z核心的试剂。抗体的质量直接影响免疫组织化学的结果评估，甚至影响诊断。因此，在选择抗体时，应严格认真选择所用抗体，应选择有良好资质的经销商和厂家的产品；应该有规范的抗体贮存方法和防污染措施。新近购入的抗体和不同批号的抗体必须有探索Z佳染色条件的预实验。 做好IHC并非易事，对于每一种抗体均应有阴性和阳性对照。同时，应根据其特点确定抗原修复的方法，既保证能充分暴露所要检测的抗原，又要避免过度修复而导致假阳性结果。在染色方法的选择上，也应该考到内源性物质（生物素、过氧化物酶、碱性磷酸酶等）的干扰。只有在各个环节、细节都认真研究，然后以常规的形式相对固定下来，才能确保IHC的结果可靠。也就是说，IHC的从业人员和实验室应逐渐建立认证制度。 自动化免疫组化染色技术是由电脑控制整个染色程序的免疫组化染色机，具有自动加抗体、自动冲洗、显色、复染及预处理等功能，有全自动和半自动、封闭型和半开放型之分。根据不同仪器大小，每次染色20～240张切片不等，整个染色程序约需60～90min左右，它不仅可以应用于免疫组化染色，某些仪器还可应用于组织化学染色、特殊染色及原位分子杂交染色。目前较为理想的仪器为Ventana公司、Biogenex公司及Dako公司的产品。 美国Ventana-ES型全自动免疫组化染色机，应用了60余种特异性抗体对常规病理中各种良性和恶性肿瘤进行了自动染色。染色结果显示，绝大部分组织片染色结果十分令人满意。该法敏感性高，特异性强，非特异性背景浅。其工作流程如下（以石蜡切片为例）。 （1）脱蜡，水化组织切片。 （2）抗原修复后，组织切片一侧贴上条形码（切片上条形码代表一种特异性抗体，切片上条形码必须与加样盘上特异性抗体条形码相配套）。 （3）组织片放人仪器，在加样盘中插入相应的针管（包括特异性抗体、第二抗体、DAB、H202、酮试剂、苏木精等）。 （4）输入染色程序，开机启动后约90min染色完毕并报警。 该仪器的优点是规范了免疫组化染色的操作步骤和方法，方法稳定，结果重复性较佳；由于使用了增敏试剂，提高了敏感性；由于采用气流混合技术，组织片上抗体形成漩涡状流动，抗原—抗体反应较为均匀，反应时间相应缩短；缓冲液喷射洗涤，降低了非特异性背景染色；自动控制各种抗体和试剂加样，减少了人工操作。自动免疫组化染色机的不足之处是仪器价格较昂贵，试剂成本较高，但它规范了免疫组化染色操作方法，预计将在各大医院得到推广应用。
2004-07-19
