仪器资讯
【产品规格】200ml/Kit
【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
名称
产品编号
规格A
试剂A
200mlB
清洗液（赠品）
2010X1118
200mlC
红细胞裂解液（赠品）
NH4CL2009
100mlD
说明书
1份【实验前准备】
A．适用仪器
Zda离心力可达1200g的水平转子离心机
B．耗材
产品名称
产品货号
产地
15ml离心管散装
339650
美国NUNC
15ml离心管架装
339651
美国NUNC
50ml离心管散装
339652
美国NUNC
50ml离心管架装
339653
美国NUNC
无菌胶头滴管或塑料滴管
【检验方法】
全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。根据样本量大小，分以下两种情况：
情况A：血液样本量小于5ml时，实验方法如下：
1.取一支15ml离心管，小心加入5ml试剂A。
2.用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-550g，离心20-30min（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z佳分离效果。）
3.离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层。4.用吸管小心吸取分离液中的中性粒细胞层，如有红细胞混杂则加入适量红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）将红细胞裂解（具体方法见“红细胞裂解液使用说明”）即得目的细胞。
5.将获得的细胞层移至另一15ml离心管中，向所得离心管中加入10ml清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。
6.250g，离心10min。
7.弃上清。
8.用吸管以5ml清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。
9.250g，离心10min。
10.重复7、8、9，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
情况B：血液样本量大于等于5ml时，实验方法如下：
1.取一支适当的离心管，依次小心加入试剂A,试剂总量与稀释后的样本量相等。
2.将血液样本小心加于分离液之液面上，450-650g（Zda离心力可至1000g），离心20-30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到Z佳分离效果。加入血液样本后，样本及分离液总体积不得超过离心管总体积的三分之二）。
3.剩余步骤同“情况A”中步骤3至步骤10。
【注意事项】
1.全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。为获得Z佳的实验结果，Z好在取血2h内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
2.本实验Z好不使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
3.分离液用量大于血液样本时，分离效果更佳。
4.血液样本不需稀释，直接进行分离即可。
5.如实验后细胞得率或活性过低，请联系TBD技术支持以寻求帮助。
【储存条件及有效期】
18-25℃保存，有效期2年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启封后置常温保存。如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验中性粒细胞提取率大于80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
红细胞白细胞
血小板（4.0-10.0）×109
含量（个/L）
（4.0-5.5）×1012中性粒细胞淋巴细胞
单核细胞（1.0-3.0）×101150%-70%20%-40%
3%-8%【相关实验技术方案】
1.所获得中性粒细胞的培养技术。
2.所获得中性粒细胞的核酸提取技术。
3.所获得中性粒细胞的鉴定方法
A.流式细胞技术
B.免疫组化技术
C.原位杂交技术
D.PCR技术
【可能存在的问题及解决方法】
1.由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
出现情况出现原因建议解决方案
离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层转速过小或离心时间过短适当增减转速
离心后目的细胞存在于分离液中转速过大或离心时间过长离心后白环层弥散细胞密度过大调整细胞密度
离心后白环层太浅或看不见细胞密度过小2.本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
3.本分离液依照国际标准，全部使用YY级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以50-100g为基数，直至达到Z佳分离效果，
离心力Z小不得小于400g，Zda不得大于1200g。离心时间以20-30min为准。
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