ELISA试剂盒 酶联免疫检测

ELISA试剂盒酶联免疫检测
ELISA试剂盒协助您的工作取得成功并获得满意的成果，将是我们一切工作的ZX，努力争取为每一个客户提供Z好质量的新品和世界yi流的服务，经过无数次市场验证，带给实验者高品质的工作体验，售后完善品质保证。
ELISA试剂盒做到这些，您的实验已经成功一半了：
①要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出，使其恢复到室温，以使结果更稳定。
②实验时，要使底物避光保存。
③用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
④吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。
⑤要保证移液枪的准确性，误差不能超过2%，可用水和电子天平进行确定，但Z好有专业人员进行矫正。
⑥要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排枪各一支，吸取不同的液体后，更换枪头。
ELISA试剂盒实验的准确性：
1、反应时间的控制：加入底物后定时观察反应孔的颜色变化，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应。
2、建议实验前预测样品含量，如样品浓度过高，应对样品进行稀释，计算结果时乘以相应的稀释倍数。
3、建议使用本试剂盒时先做预实验（即先做标准曲线，SY几个标本），如果对本试剂盒有任何疑问，可与我公司联系。
ELISA试剂盒秉承“全面、专业、优质、快捷”的服务理念，协助推动ZG生命科学研究的进步，为了更好更快捷的提供服务，存备了大量现货，配合的销售队伍以及专业的技术支持，随时为客户提供Zyou质的服务，客户的满意和信任是我们Zda的动力。

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ELISA试剂盒北京现货
ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如:ELISA检测试剂盒、ELISAKit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。
ELISA试剂盒自从60-70年代问世以来，得到全世界科研工作者的认可及推崇，在欧美及ZG获得很大的推广，尤其是国内生化领域的长足发展。
Elisa生物试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测。

ELISA试剂盒酶联免疫检测
原理

ELISA手工洗板8道洗液头免疫测定技术的基础在于抗原抗体之间的特异结合反应，所以任何优质的诊断试剂离不开优质的原料，如抗原抗体，酶等。以前用于免疫测定的抗原通常为各种纯化抗原，而抗体则为纯化抗原免疫动物后获得的多克隆抗体和使用杂交瘤技术得到的单克隆抗体，而抗原或抗体的标记物如酶标结合物则通过各种化学合成方法制备。近年来，随着分子生物学的发展，使用基因工程方法制备各种特殊的抗原或抗体及其酶结合物等免疫测定试剂几成为现实的新一代试剂，各种新型使用的测定方法也不断出现。
HBsAg试剂特点(检测模式:临床抗体夹心法):包被抗体为山羊多抗。多抗具有高亲和性和对抗原各种表位的反应性。酶表抗体为与HBsAg有不同结合位点的鼠复合单位，可测得HBsAg变异样品，提高检测的特异性(99.98%)提高检测的灵敏度，应用ParlEhrich学说(PEI)HBsAg标准品，对ad标准品的灵敏度为0.05ng/ml对ay标准品灵敏度为0.025ng/ml
ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是ZG型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEVIgM抗体，这些抗体就会与HEV的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与diyi次孵育结合上的HEVIgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEVIgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长:450nm处测量O.D.值,按照本HEVIgM抗体elisa试剂盒的测试标准,O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性。

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用途
elisa技术流程ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。

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特点
一、GX、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、节省实验经费。
elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。
折叠编辑本段制备方法
包括以下步骤:
1)抗原表位的计算机筛选;
2)抗原的制备;
3)血清的采集;
4)间接ELISA方法的建立;
5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证;
6)试剂盒的稳定性验证;
7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量发病样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播。
折叠编辑本段组成结构
1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、血浆:EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液。
5、保存:如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
此IBL试剂盒能用于小鼠血清,EDTA血浆,细胞上清中白介素-6的定量检测
试剂盒成分
1预包被板:抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化96T
2酶标记抗体:(30倍浓缩)HRP标记抗小鼠白介素-6兔子IgG,亲合纯化0.4mLx1
3标准品:重组小鼠白介素-60.5mLx2
4EIA缓冲液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS30mLx1
5标记抗体稀释液:含1%BSA,0.05%吐温20BPS12mLx1
6显色剂:TMB底物液15mLx1
7终止液:1N硫酸12mLx1
8浓缩洗涤液:(40倍浓缩)含1%BSA,0.05%吐温20BPS50mLx1操作说明1实验所需器材(但试剂盒没有提供)酶标仪(450nm)微移液管及其吸嘴量筒及烧杯去离子水冰箱(4°C)坐标纸(log/log)吸水纸试管(用于标准品稀释)温育箱(37°C±1°C)洗瓶(用于洗板)一次性试剂管(用于浓缩酶标记抗体和显色剂)

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折叠编辑本段操作方法
双抗体夹心法
1.包被:用0.05MPH9.碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。
2.加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体:于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时，洗涤。
4.加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10~30分钟。
5.终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定:可于白色背景上，直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以"+"、"-"号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
间接法
1.用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜;
2.次日洗涤3次;
3.加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤;
4.(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml;
5.37℃孵育35-60分钟，洗涤;
6.'Z后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同"双抗体夹心法"的4、5、6。
折叠编辑本段发展前景
临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。分子生物学正在并Z终肯定会让对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，对以前一些难以检测的生物活性物质的测定，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。
折叠编辑本段主要设备
试剂
(1)包被缓冲液(PH9.60.05M碳酸盐缓冲液):
Na2CO31.59克
NaHCO32.93克
加蒸馏水至1000ml
(2)洗涤缓冲液(PH7.4PBS):0.15M
KH2PO40.2克
Na2HPO412H2O2.9克
NaCl8.0克
KCl0.2克
Tween-200.05%0.5ml
加蒸馏水至1000ml
(3)稀释液:
牛血清白蛋白(BSA)0.1克
加洗涤缓冲液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。
(4)终止液(3MH2SO4):
蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。
(5)底物缓冲液(PH5.0磷酸枣柠檬酸):
0.2MNa2HPO4(28.4克/L)25.7ml
0.1M柠檬酸(19.2克/L)24.3ml
加蒸馏水50ml。
(6)TMB(四甲基联苯胺)使用液:
TMB(10mg/5ml无水乙醇)0.5ml
底物缓冲液(PH5.5)10ml
0.75%H2O232μl
(7)ABTS使用液:
ABTS0.5mg
底物缓冲液(PH5.5)1ml
3%H2O22μl
(8)抗原、抗体和酶标记抗体。
(9)正常人血清和阳性对照血清。
器材
(1)聚苯乙烯塑料板(简称酶标板)40孔或96孔，ELISA检测仪，50μl及100μl加样器，塑料滴头，小毛巾，洗涤瓶。
(2)小烧杯、玻璃棒、试管、吸管和量筒等。
(3)4℃冰箱，37℃孵育箱。
试验原理
试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
自备材料
1.蒸馏水。
2.加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.振荡器及磁力搅拌器等。
安全性
1.避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2.实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3.不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
5.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
6.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
8.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

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