菌落计数有哪些方法

活菌计数法又被叫做间接计数法。活菌计数法是将定量的试验菌加入到一定浓度的定量药物内，经过培养一定的时间后，取样进行活菌计数。活菌计数是在琼脂培养基中加入定量的药物与试验菌作用后的混合液稀释后的溶液，制成平板，培养后数平板上形成的菌落数 。间接计数法测得的仅是死、活菌总数，而这类方法所得的数值往往小于直接计数法测得的数值。

活菌计数法一般有平板菌落计数、液体稀择Zda或然数法（ most probable number, MPN）测数、薄膜过滤计数法。

平板菌落计数

这种方法是指在适宜的培养基中，每一个分散的活细胞都具有生成繁殖并能形成一个菌落的能力。所以待测样品所含的活菌数就是菌落数。10 倍系列稀释单细胞微生物待测液后，在琼脂平板培养基上接种一定浓度的定量稀释液培养，稀释液中含有的活细胞数就是长出的菌落数，供测样品中的活细胞数就能够被计算出来。然而，应该留意的是，因为各种原因，平板上的单个菌落可能并不是由一个菌体细胞形成的，所以在对单位样品含菌数进行表达时，可以使用单位样品中形成菌藩单位来表示，即CFU/ml 或CFU/g(CFU 即colony-forming unit ）。

液体稀择Zda或然数法（ MPN）测数

获取单细胞微生物悬液定量（ 1 ml），使用培养液作定量10 倍系列稀释，重复3 ～5 次，将不同稀释度的系列稀释管置适宣温度下培养，以稀释度合适为前提。在菌浓度相对较高的稀释管内均出现菌生长，而自某个稀释度较高的稀释管开始至稀释度更高的稀释管中均不出现菌生长，按稀释度自低到高的顺序，把Z后3 个稀释度相对较高的、出现菌生长的稀释管之稀释度称为临界级数。由3 ～5 次重复的连续三级临界级数族得指数，查相应重复的Zda或然数表求得Zda可能数，再乘以出现生长的临界级数的Zdi稀释度，即可测得比较可靠的样品活菌浓度。 

薄膜过滤计数法

在对于水与空气中的活菌数量进行测定时，因为含菌浓度低，就可以先通过微孔薄膜（如硝化纤维薄膜）过滤浓缩待测样品（一定体积的水或空气），然后在适当的固体培养基上培养漉膜，长出菌落后即可计数。