3·15 后续：干海参中多种农药、兽药残留检测方案来了！

3·15 后续

7月16日晚央视“3·15”晚会曝光了山东即墨地区存在“养海参整箱放敌敌畏，南方海参冒充北方海参”的现象。养殖户坦言，为了清除不利海参生长的其他生物，他刚刚往池塘里加入了不少敌敌畏。而这种现象非常普遍。

一些大棚海参养殖户偷偷告诉记者，他们在养殖过程中也会使用土霉素等兽药原粉，以防海参死亡。

《农药管理条例》全文(2017修订)第三十四条规定：农药使用者不得扩大使用范围、加大用药剂量或者改变使用方法。

敌敌畏产品包装上明确规定：适用于棉花、小麦、茶树、蔬菜、苹果等多种植物上害虫及多种粮仓、卫生害虫的FZ。并不可以使用在海参这类海产品上。

迪马科技快速响应

针对此次央视“3·15”晚会曝光的海参问题，迪马科技快速响应，率先推出了湿海参中多种农药残留的筛查GC-MS法、水中敌敌畏等有机磷农药、水中多种兽药残留检测等相关方案。为进一步加强检测方案的适用性，迪马科技又开发了干海参中多种农药、兽药残留检测方案，供大家参考。

详细检测方案如下：

一、海参中多种农药残留的筛查

方法一 QuEChERS -GC-MS法

方法二 QuEChERS –UPLC-MS/MS法

二、海参中8种抗生素的检测 UPLC-MS/MS法

一、海参中多种农药残留的筛查

方法一 QuEChERS -GC-MS法

01 适用范围

本方案适用于海参中敌敌畏等多种农药的筛查。

02 标准品配制

混合标准储备溶液：准确称取标准品，用甲苯分别配制成10mg/mL的标准储备液，再用乙腈配制成2.5μg/mL的混合标准储备液。

03 提取

取湿海参，充分均质混匀；干海参样品：参照 《GB 31602-2015 食品安全国家标准 干海参》 附录A.3.4.2进行复水后均质，或者直接均质，用乙腈提取。

(1)称取5g样品，加入5mL水、15mL乙腈、QuEChERS萃取盐*，振荡10min，6000rpm离心2min，收集上层清液；

(2)将上清液在35℃水浴下减压蒸馏至干，加入1mL乙腈，超声溶解，待净化。

*QuEChERS萃取盐（Cat#：64521S）：内含4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠。

04 净化

ProElut QuE 2mL Tube (Cat#：64609)

将待净化液转移到2mL ProElut QuEChERS净化管，涡旋混合1min，8000rpm离心2min，取出上清液，供GC-MS分析。

05 色谱条件

色谱柱：DM-5MS，30m×0.32mm×0.25μm (Cat.# 8231)

进样口温度：240℃

升温程序：初始温度70℃，保持2min，以25℃/min升温至150℃，再以3℃/min升温至200℃，再以8℃/min升温至280℃，保持12min。

载气：氦气，流速：1.46mL/min

进样方式：不分流进样

进样量：1.0μL

离子源温度：230℃

接口温度：280℃

溶剂延迟：5min

电子轰击电离源（EI）：选择离子监测模式（SIM），分组监测见表1

06 添加回收结果

干海参中多种农药残留GC-MS检测的添加回收结果。加标量：2.5μg/mL混标，加40μL。

方法二 QuEChERS –UPLC-MS/MS法

01 适用范围

本方案适用于海参中敌敌畏等多种农药的筛查。

02 标准品配制

混合标准储备溶液：准确称取标准品，用乙腈分别配制成1.0mg/mL的标准储备液，再用甲醇配制成2.5μg/mL的混合标准储备液。

03 提取

(1)取湿海参，充分均质混匀；干海参样品：参照 《GB 31602-2015 食品安全国家标准 干海参》 附录A.3.4.2进行复水后均质，或者直接均质，用乙腈提取。

(2)称取5g样品，依次加入5mL水、15mL乙腈、QuEChERS萃取盐*，振荡5min，6000rpm离心2min，收集1.5mL上层清液，待净化；

*QuEChERS萃取盐（Cat#：64521S）：内含4g无水硫酸镁、1g氯化钠、1g柠檬酸钠、0.5g柠檬酸氢二钠。

04 净化

ProElut QuE 2mL Tube (Cat#：64609)

将待净化液转移到2mL ProElut QuEChERS净化管，涡旋混合1min，8000rpm离心2min，取出1mL上清液，40℃水浴下，缓慢氮气吹干，用初始流动相定容至1mL，上机分析。

05 色谱条件

UPLC 条件  

色谱柱：Leapsil C18，100×2.1mm，2.7μm (Cat#：86005)

流速：0.4mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A：0.1%甲酸水    B：乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

06 添加回收结果

干海参中多种农药残留UPLC-MS/MS检测的添加回收结果：

二、海参中8种抗生素的检测 

UPLC-MS/MS法

01 适用范围

本方案适用于海参中土霉素、四环素、金霉素、氧氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星和氯霉素等8种抗生素的筛查。

02 标准品配制

混合标准储备溶液：准确称取标准品，用甲醇分别配制成1.0mg/mL的标准储备液，再用甲醇配制成0.5μg/mL的混合标准储备液。

03 提取

(1)取湿海参，充分均质混匀；干海参样品：参照 《GB 31602-2015 食品安全国家标准 干海参》 附录A.3.4.2进行复水后均质，或者直接均质，用乙腈提取。

(2)称取5g样品，加入20mL Mcllvaine缓冲溶液，涡旋混合1min，超声10min，6000rpm离心5min，取出上清液；

(3)向下层残渣中继续加入20mL、20mL Mcllvaine缓冲溶液，按照步骤(2)重复提取两次；合并三次提取液，待净化。

*Mcllvaine缓冲液(pH4.0)：称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)27.6g、柠檬酸(C6H8O7·H2O)12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2g,用水溶解后稀释并定容至1000mL。

04 净化

ProElut PLS 200mg/6mL (Cat#: 68012)

(1)活化：6mL甲醇，6mL水活化；

(2)上样：加入待净化液*，弃去流出液；

(3)淋洗：加入2mL 5%甲醇水，弃去流出液，小柱抽干1min；

(4)洗脱：加入6mL甲醇，收集流出液；

(5)重新溶解：45℃氮气吹至100μL，用初始流动相定容至1mL，上机分析。

*由于上样体积超过柱容积，应分次上样或者在SPE柱上安装20mL储液管(Cat#: 4811)和适配器(Cat#: 4803)

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

05 色谱条件

UPLC 条件

色谱柱：Leapsil C18，100×2.1mm，2.7μm (Cat#：86005)

流速：0.3mL/min

进样量：10μL

柱温：35℃

流动相：A:0.1%甲酸水    B:乙腈

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正/负离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：4500V/-4500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃

06 添加回收结果

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