解决方案

人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析

人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析

药品名称:
通用名:人类白细胞抗原C(HLA-C)酶联免疫分析试剂盒
使用目的:
本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中人类白细胞抗原C(HLA-C)含量
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人类白细胞抗原C(HLA-C)水平用纯化的人类白细胞抗原C(HLA-C)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入人类白细胞抗原C(HLA-C),再与HRP标记的HLA-C抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成Z终的黄色颜色的深浅和样品中的人类白细胞抗原C(HLA-C)呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人类白细胞抗原C(HLA-C)浓度
试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品(180g/L) 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性
操作步骤
标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在**第二孔中分别加标准品100l,然后在**第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从**孔第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔,再在第三第四孔分别加标准品稀释液50l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉,再各取50l分别加到第五第六孔中,再在第五第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五第六孔中各取50l分别加到第七第八孔中,再在第七第八孔中分别加标准品稀释液50l,混匀后从第七第八孔中分别取50l加到第九第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l,混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉(稀释后各孔加样量都为50l,浓度分别为120g/L,80g/L ,40g/L,20g/L, 10g/L)
加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品Z终稀释度为5倍)加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
温育:用封板膜封板后置37温育30分钟
配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干
加酶:每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外
温育:操作同3
洗涤:操作同5
显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟.
终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)
测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行

文件大小:13KB

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