人可替丁(Cotinine )酶联免疫分析（ELISA）

人可替丁(Cotinine )酶联免疫分析（ELISA）

药品名称：
通用名：人可替丁(Cotinine )酶联免疫分析试剂盒
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中可替丁(Cotinine )含量
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人可替丁(Cotinine )水平用纯化的人可替丁(Cotinine ) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入可替丁(Cotinine )，再与HRP标记的可替丁(Cotinine )抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色颜色的深浅和样品中的人可替丁(Cotinine )呈正相关用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人可替丁(Cotinine )浓度
试剂盒组成
1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶
2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（27ng/L） 0.5ml×1瓶
3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶
4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份
5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张
6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的（HRP）活性
操作步骤
标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在**第二孔中分别加标准品100l，然后在**第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从**孔第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别加到第五第六孔中，再在第五第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五第六孔中各取50l分别加到第七第八孔中，再在第七第八孔中分别加标准品稀释液50l，混匀后从第七第八孔中分别取50l加到第九第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l，混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉（稀释后各孔加样量都为50l，浓度分别为18ng/L，12ng/L ，6ng/L，3ng/L， 1.5ng/L）
加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）待测样品孔在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品Z终稀释度为5倍）加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀
温育：用封板膜封板后置37温育30分钟
配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干
加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外
温育：操作同3
洗涤：操作同5
显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37避光显色15分钟.
终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）
测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 测定应在加终止液后15分钟以内进行