转染双启动子杆状病毒表达载体在昆虫细胞共表达人白细胞

通过体外表达rhIL-12，以供研究其在体内外的生物学效应方法外周血单个核细胞(PBMC)粘附细胞和人口腔表皮样癌细胞KB分别经SAC(含A蛋白的金黄色葡萄球菌Cowan菌株)IFN-＋LPS和PDBu(12，13-二丁酸佛波酯)刺激，以GIT(异硫氰酸胍)一步法提取细胞总RNA，经RT-PCR技术获取IL-12 P40和P35 cDNA，将两条基因分别插入双启动子杆状病毒转染载体pAcUW51的多角子启动子和P10启动子下游，构建真核表达载体pAcUW51/IL-12，与AcNPV共转染昆虫细胞Sf9，获取表达IL-12的细胞株，表达产物分别经SDS-PAGE，Western blot，ELISA和生物学活性鉴定结果rhIL-12产物的相对分子质量(Mr)经SDS-PAGE和Western blot鉴定为67×103，表达水平为15.4～15.7g/106细胞MTT法检测IL-12表达产物促进NK细胞杀伤K562细胞的能力比对照可提高60%，刺激PHA激活的PBMC增殖的能力Z高可达到58%结论成功构建了双启动子杆状病毒表达载体pAcUW51/IL-12，获得了共表达IL-12 P40和P35亚单位的昆虫细胞株 超声波清洗机