工艺案例|外泌体纯化——小度给您来支招

外泌体（Exosomes）是一种能被机体内大多数细胞分泌的微小囊泡，具有脂质双层膜，直径大约为30-150nm，是纯天然的纳米颗粒。外泌体的膜主要由脂质和蛋白质组成，其内容物中除蛋白质外还发现了多种核酸，包括DNA、mRNA、microRNA和ncRNA等。

图1 外泌体的形成、内容物

近年来，外泌体因其生物相容性好、免疫源性低、可穿越血脑屏障等优势成为药物递送载体的“后起新秀”。全球外泌体相关企业近1/3布局外泌体诊断业务；超过2/3布局外泌体治疗。集中布局在肿瘤、脑部疾病、疫苗开发、基因治疗/罕见病四大领域。外泌体产业处在蓬勃发展的阶段，随着人们对外泌体更深入的研究和了解，其前景不可估量，必将有极大的临床应用前景，也因此衍生出外泌体行业对其分离纯化技术的需求。

图2 外泌体主要布局疾病领域（资料来源：动脉网）

外泌体的分离和富集主要通过差速超速离心、密度梯度超速离心、过滤、超滤、超滤与超速离心结合、试剂盒提取等传统方法。传统方法在科研方面应用较多，但在规模放大和未来规模化生产上存在成本、效率问题。

图3 外泌体分离纯化流程  A. 超速离心  B.密度梯度离心

制药原料事业部深耕层析填料行业十多年，在外泌体纯化方向紧跟市场需求，开发了成熟的外泌体层析纯化工艺，并且得到客户的认可与应用。考虑到客户样品的不同，我们提供三套层析纯化解决方案供您选择。

分子排阻层析利用外泌体和样品中其它成分在分子大小上的差异进行分离，这一方法既可以保持样品的完整性和生物活性，又可以很好地进行放大，处理大量样品。

Focore 700+Q Focurose HP

Focore700的惰性外壳不允许超过700kDa的大分子进入核内，而外泌体样品中的小分子，比如宿主细胞蛋白、DNA片段等，进入核内后，与兼具阴离子交换和疏水作用的辛胺基团结合，从而达到分离目的。

Q Focurose HP可以通过目标分子与杂质分子间不同的带电荷量进行分离。

Buffer A：20mM PB , pH7.0

Buffer B：20mM PB , 1M NaCl, pH7.0

Buffer A：20mM PB , pH7.0

Buffer B：20mM PB , 1M NaCl, pH7.0

1. 原液的粒径分布

2. 两步纯化后的粒径分布

从Nanosight结果看，经纯化后，样品具有良好的粒径分布，纯化效果良好。

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