乳胶微球创新力|了解技术，掌握方法

2024-08-09388

背景

生化诊断是我国最早发展并最为成熟的体外诊断手段之一。根据《中国体外诊断产业发展蓝皮书（2021-2022年卷）》，在我国体外诊断行业的细分市场中，生化诊断市场占比位居第二。随着我国诊疗需求的持续增长，IVD行业也在不断发展。生化诊断因其技术成熟、操作简便、分析时间短、检验成本低等优点，仍然是重要的体外诊断细分领域，行业发展稳健。在集采持续推进的背景下，技术创新、质量控制、渠道能力和性价比成为生化企业的核心竞争力。

生化诊断好帮手

胶乳免疫比浊法是生化诊断中常用的检测技术。在胶乳比浊试剂的开发过程中，乳胶微球的偶联方法通常分为一步法和两步法。一步法偶联工艺省略了费时繁琐的离心步骤，使微球偶联过程更加简便，可有效控制胶乳比浊试剂的批间差异，提升产品质量。技术团队基于VDO乳胶微球开发了一步法偶联工艺，通过全面的性能评估，验证其完全满足试剂需求，为生化企业提质增效提供了更多选择。

一步法偶联工艺参考流程

缓冲液配制

1.1 偶联缓冲液：50mM 硼酸，pH 8.0；

1.2 EDC溶液：5mg/mL的EDC溶液，用偶联缓冲液配制，现配现用；

1.3 NHS溶液：10mg/mL的NHS溶液，用偶联缓冲液配制，现配现用；

1.4 封闭液：200mM 甘氨酸缓冲液，20%的BSA；

1.5 R2保存液：20mM TAPS，10% 蔗糖，10% 甘油，2% BSA，0.1% ProClin 300，pH8.0。

偶联流程

（该流程用于将1.2mg CysC抗体偶联到16mg微球上，微球用量、抗体用量、缓冲液pH 值和EDC 投入量可根据项目实际情况进行优化。）

2.1 取3520μL偶联缓冲液于10mL烧杯中（含转子），加入160μL微球（固含10%），置于磁力搅拌器上，充分混匀；

2.2 取96μL Cysc多抗(浓度为12.5mg/mL)加到微球中，置于磁力搅拌器上，室温混匀1h；

2.3 取32μL NHS加入微球中，充分混匀；再取32μLEDC加入微球中，置于磁力搅拌器上，室温混匀4h；

2.4 加入160μL封闭液，置于磁力搅拌器上，室温封闭1h；

2.5 封闭结束，加入4mL R2保存液，超声，测试。

一步法偶联工艺验证数据

采用一步法偶联工艺，将VDO 100nm乳胶微球（货号：PS0100CHA）制成CysC胶乳免疫比浊试剂，对其精密度、线性范围、分析灵敏度、加速稳定性、批间差进行验证。（标准要求参照市售的A公司CysC测试试剂盒说明书）

定标数据

方法：取CysC校准品，用迈瑞生化仪BS450进行定标。

精密度

方法：用校准品稀释液将抗原稀释至低、中两个浓度，每个浓度重复测试10次。

结果显示：低值样本和中值样本的变异系数（CV）分别为0.95%和0.25%，满足批内精密度CV≤5%的要求。

线性范围

方法：使用抗原配制浓度为8mg/L的校准品，之后用校准品稀释液依次稀释至4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0mg/L。对上述7个浓度点进行检测，每个浓度点测试2次，计算均值。以稀释浓度为自变量，以测定结果均值为因变量求出线性回归方程并计算线性回归的相关系数（r）。

结果显示：线性相关系数为1，满足在[0.40,7.50]mg/L的范围内，线性相关系数r不低于0.9900的要求；线性绝对偏差满足在[0.40,2.00]mg/L区间内，不超过0.20mg/L；线性相对偏差满足在（2.00,7.50]mg/L区间内，不超过±10%的要求。

分析灵敏度

方法：检测CysC样本，计算吸光度的差值（?A）的绝对值。

结果显示：测定浓度1.00mg/L的待测物时，吸光度差值（△A）为0.06，在0.010-0.200范围内，满足要求。

加速稳定性

方法：将试剂分为两组，分别置于37℃加速和 4℃存放。在第14天，将两组试剂取出进行定标并计算相对偏差。

结果显示：37℃加速14天与4℃存放14天的试剂在除0点外，5个浓度点的测值相对偏差均小于10%，满足要求。

批间差

方法：采用一步法偶联工艺，将3个批次VDO 100nm乳胶微球（货号：PS0100CHA，批号：022317108A、022320708A、022321508A）制成3批CysC胶乳免疫比浊试剂（以下称为批次1、批次2、批次3），对质控品Q1、Q2分别测试，每个批次测试3次，分别计算测定的均值和批间相对极差。