CE-SDS-LIF方法测定腺相关病毒的结构蛋白纯度
2021-03-113920腺相关病毒(AAV)是常用于细胞/基因ZL的载体,由衣壳蛋白及包装的核酸组成。AAV具有表达时间长、特异性强、安全性高、免疫原性低等优势,是细胞/基因ZL中重要的组成部分。AAV衣壳主要分为VP1、VP2和VP3三种蛋白构成,三种结构蛋白的纯度分析是AAV产品质量和安全的重要检测项目;而AAV产品具有多种血清型,且普遍浓度较低,需开发一种针对不同血清型均具有较高分离度和灵敏度的分析方法。
PA 800 Plus药物分析系统连接激光诱导荧光检测器(LIF)(图1)并使用SDS-MW分子量测定试剂盒是分析AAV结构蛋白纯度的有效方法,检测结果如图2。
图1. PA 800 Plus药物分析系统与SDS-MW试剂盒
相比于其他方法,SCIEX提供的CE-SDS-LIF解决方案具有以下优势:
· 分辨率高:可将VP1、VP2、VP3进行基线分离,便于对杂质及结构蛋白含量的测定;
· 灵敏度高:使用超高灵敏度的LIF检测器,检出限 (LOD)可达1×109 GC/mL;
· 样品前处理简单:两步加热即可完成样品的变性及标记(染料为P503),无需进行染料的洗脱;
· 重现性好:迁移时间的相对标准偏差(RSD)<0.5%,纯度的RSD<5%(n=6);
· 线性范围宽:样品浓度1×1010 GC/mL至1.6×1014 GC/mL的R2为0.9989;
· 方法简便:使用SDS-MW试剂盒即可完成检测。
图2. CE-SDS-LIF方法分析AAV的结构蛋白纯度
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- 美国SCIEX PA 800 plus 生物制药分析系统
- 品牌:美国SCIEX
- 型号:PA 800 plus