牛磺酸及其来源物乙醇胺的相关检测研究

2024-06-1973

牛磺酸是一种含硫氨基酸，广泛分布于体内各个组织和器官，且主要以游离状态存在于组织间液和细胞内液中，最先于公牛胆汁中发现而得名。

长期以来一直被认为是含硫氨基酸的无功能代谢产物，后来经诸多研究发现，动物体内所有正常生理功能的维持和调节都需要牛磺酸的参与。随着对牛磺酸生理和药理作用认识的不断深入 , 牛磺酸作为药物、食品功能强化剂及饲料添加剂被广泛应用于人们的生活中。于是各种牛磺酸的检测方法也就相继被人们开发出来，今天就牛磺酸的检测知识为大家详细的说明一下。

牛磺酸的检测方法有很多，目前食品标准中常用的方法是柱前或柱后衍生化高效液相色谱法。例如现行国标（GB 5009.169-2016）就是使用邻苯二甲醛 (ortho-phthalaldehyde, OPA) 柱后衍生以及单磺酰氯柱前衍生法。

一、柱后衍生法利用牛磺酸与 OPA 在碱性条件下生成相应的衍生物，通过用荧光检测器来测定衍生物的含量，该法具有方法稳定、干扰小、重现性较好及回收率较高等优点。

色谱柱：MARS MNa 5u，250*4.6mm（货号：FMG-1036-EONU）

流动相：柠檬酸三钠溶液（称取19.6g柠檬酸三钠，加950mL水溶解，加入1mL苯酚，用硝酸调pH至3.10-3.25，经0.45um微孔滤膜过滤。

流动相流速：0.4mL/min

荧光衍生溶剂流速：0.3mL/min

柱温：55℃

柱后衍生系统：PCR6000柱后衍生系统

检测器：荧光检测器

检测波长：激发波长：338nm，发射波长：425nm

进样量：20uL

样品图谱

定量限0.5ug/ml图谱

检出限0.17ug/ml图谱

重现性说明：用牛磺酸标样做重现性实验，用20ug/mL浓度的标样6针，其保留时间的相对标准偏差（RSD）是0.062%，峰面积的相对标准偏差（RSD）是0.126%。

二、质谱直接检测牛磺酸。因衍生以及其它离子对试剂方法的麻烦之处，以及无法直接用质谱分析的原因。采用智能混合柱Comixsil HAC开发了一个可用于质谱检测器上直接检测牛磺酸的应用。如下：

色谱柱：Comixsil HAC 3u 100*3.0mm（货号：FMD-HAC3-YONU）

流动相：乙腈：水：100mM甲酸铵 pH3=75：13：12

流速：0.6mL/min

检测器：ELSD，45℃

此方法可兼容ELSD, CAD, MS检测器。

三、目前，国内外多采用乙醇胺法制备牛磺酸，即由乙醇胺、硫酸等经酯化、磺化反应，再经浓缩、分离、重结晶、烘干制成产品。对于单乙醇胺的检测方法，国内外报道的较多。在水溶液中的痕量分析法有离子对色谱分析，工业气中的痕量分析法有衍生化气相色谱分析，衍生化液相色谱分析，衍生化薄层色谱分析，毛细管电泳，气相色谱分析，离子排阻色谱分析等。

在此，我们分享以下直接关于HPLC法检测乙醇胺的液相应用。

1.可在常规HPLC上配备ELSD或CAD检测器直接检测

色谱柱：Comixsil RP-100 5u 100*3.0mm（货号：FMD-100R5-YONU）

流动相：20mL乙腈+979mL+1mL TFA

流速：0.6mL/min

样品浓度：0.5mg/mL

进样量：2uL

检测器：Corona CAD（电雾式检测器）