犬瘟热病毒抗体（CDVAb）ELISA试剂盒实验说明书

文档简介犬瘟热病毒抗体(CDVAb)ELISA试剂盒实验说明书本试剂盒仅供研究使用。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中犬瘟热病毒抗体(CDVAb)表达。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中瘟热病毒抗体(CDVAb)相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成Z终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中犬瘟热病毒抗体(CDVAb)的存在与否。犬瘟热病毒抗体(CDVAb)ELISA试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8阳性对照0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9阴性对照0.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。犬瘟热病毒抗体(CDVAb)ELISA试剂盒操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50l。然后在待测样品孔先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。7.温育：操作同3。8.洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.10.终止：每孔加终止液50l，终止反应(此时蓝色立转黄色)。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00;阴性对照平均值≤0.10临界值(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值<临界值(CUTOFF)者为瘟热病毒抗体(CDVAb)阴性阳性判定：样品OD值≥临界值(CUTOFF)者为瘟热病毒抗体(CDVAb)阳性。注意事项1．操作严格按照犬瘟热病毒抗体(CDVAb)ELISA试剂盒说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如用完，板条应装入密封袋中保存。3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。5．底物请避光保存。6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为630nm7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用时必须注意安全。保存条件及有效期1．试剂盒保存：2-8℃。2．有效期：6个月