血浆中C5a的ELISA测定

文档简介实验原理将抗C5a单克隆抗体包被固相聚苯乙烯板，加入经聚乙二醇（PEG）处理的待测样本，然后依次加入兔抗人C5a-IgC多克隆抗体和过氧化物酶标记的猪抗兔IsC，再加入底物2，2’-连氮-双（3-乙基苯骈唑啉-6-磺酸盐）（ABTS）和H2O2显色，于酶标仪405mn处测定每分钟光密度增加量（OD/min），以OD/min为纵坐标，C5a标准晶浓度为横坐标绘制标准曲线图，求出待测样本中C5a的含量。实验试剂1.PBSPH7.2，9mmol/L磷酸盐缓冲液含140mmol/LNaCl。2.PBS-TweenpH7.2PBS含0.05％Tween20，简称PBS-T。3.底物溶液：100mL2mmol/LABTS溶液中含100mmol/L醋酸钠，50mmol/L磷酸钠，2.5mmol/LH2O2。4.沉淀剂：①：100mLpH8.0，20mmoL/LTris-甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000，0.8gRivanol；沉淀剂②：100mLpH2.0.100mmol／L甘氨酸-HCl缓冲液中含20gPEG4000。