如何高效进行成年鼠脑单细胞悬液制备

作为构成神经系统的基本结构和功能单位，神经细胞的体外分离、培养在神经科学研究中占据前沿地位。由于神经元分离后不会再次分裂、增殖，因此在进行相关细胞实验时，需要高效地制备高质量原代神经细胞保证实验材料的供应。

然而神经细胞的分离制备难度较大，相较于新生鼠，成年鼠脑的解离更复杂，需要机械和酶解联合作用来降解细胞外基质，同时大量的髓鞘碎片和红细胞也会干扰下游实验。

那么，如何快速制备高质量的大/小鼠神经细胞悬液样本呢？接下来，我们从实验仪器及材料、实验步骤和实验结果一一介绍，希望对你的实验有所帮助。

实验仪器及材料

瑞沃德 DSC-400单细胞悬液制备仪；

瑞沃德 HJ-400 加热套；

瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年脑组织温和酶解试剂盒；

瑞沃德 SCT-100组织处理管；

70μm 细胞滤器；

瑞沃德眼科手术器械；

细胞培养耗材、移液枪等。

实验步骤

1、按照说明书要求，混合配置酶mix并37℃水浴激活。

2、剥离成年鼠（P>7）脑组织，暂存至盛有HBSS（含Ca2+和Mg2+）的培养皿中，用眼科镊轻轻地将脑组织的血管尽可能去除。

尽可能剔除脑组织上的血管

3、将脑组织和酶mix放于组织处理管中，用剪刀将全脑简单剪成4块。

4、将组织处理管倒置至单细胞悬液制备仪上，安装加热套，运行程序 M_ABrain_Heater_2。

5、润湿细胞滤器，过滤细胞悬液样本，300×g ，离心10 min。

使用细胞筛过滤杂质

6、转移细胞样本至15mL离心管，加入去碎片试剂后混匀，上层铺预冷的PBS，3000×g， 4℃，升速为5，降速为3，离心10min，保留下层细胞后洗涤收集。

去除碎片，收集下层细胞

7、裂红操作（可选）。

8、细胞计数及流式检测。

实验结果

使用瑞沃德单细胞悬液制备仪处理成年小鼠脑组织获得的细胞可达90%，细胞活性高，不影响下游实验。瑞沃德 DHABE-5003大小鼠成年脑组织温和酶解试剂盒，可用于成年大鼠或小鼠(P>7)全脑组织的单细胞悬液制备，可支持脑内所有神经及非神经细胞的分离。

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