手把手教你！动物源性食品中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量测定的前处理方法

动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量测定的前处理方法

敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷的危害及检测目的

敌bai虫、敌敌畏与蝇毒磷均属于有机磷农药，作为一种杀虫剂，有机磷农药具有广谱、GX、低毒、使用方便等特点，广泛应用于农业、畜牧业、水产、林业等方面的防虫或杀虫工作。有机磷农药的广泛使用，在给人们增加利益的同时也给环境造成了严重的污染。大量食用含有敌bai虫等农药残留的食物会导致机体正常生理功能的失调，引起病理改变和毒性危害。因此，为保障动物源性食品的安全，我国农业农村部和国家市场监督管理总局2019年发布的GB 31650-2019《食品安全国家标准食品中兽药ZD残留限量》中明确规定了敌bai虫和敌敌畏在牛和猪靶组织中的残留限量。

本文阐述了如何将敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷从样品基质中分离提取出来，并经过净化后，转化成液质联用仪可以检测的形式。以提取、净化为ZD，依据国标GB 23200.94-2016，为检测人员和相关领域研究人员提供一定的参考。

检测项目：敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷

应用范围：畜、禽分割肉、盐渍肠衣和蜂蜜

液相色谱-质谱/质谱法

方法原理：试样中的敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷用二氯甲烷或乙酸乙酯提取，提取液经浓缩、脱脂后，用液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标峰面积法定量，子离子丰度比定性。

前处理仪器：

分析天平（感量0.01 g 和0.0001 g）；超声波清洗器；旋涡混匀器；旋转蒸发仪；离心机（5000 r/min）；均质器；0.45 μm微孔滤膜。

检测仪器：UHPLC-MS/MS+ESI源

试样的制备与保存

1. 分割肉

取样品中有代表性的约500 g，用组织捣碎机捣碎，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

2. 肠衣

取有代表性样品约100 g，用剪刀剪碎至2 毫米以下，装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。

3. 蜂蜜

取有代表性样品约500 g，搅拌均匀后装入洁净容器内密封并做好标识。

试样保存与制样要求：分割肉、肠衣、蜂蜜等试样于零下18 ℃ 以下冷冻保存。在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

前处理方法

1.分割肉

准确称取5 g均匀试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入5 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，用均质器（10000 r/min）均质2 min，4000 r/min离心3 min，将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷均质提取两次。离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

2.肠衣

准确称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入2 g无水硫酸钠混匀，再加入15 mL二氯甲烷，盖上盖混匀，置于超声波清洗器中超声30 min，冷却后将有机相过滤转移至100 mL梨形蒸馏瓶中，残渣再用2×10 mL二氯甲烷混匀超声提取两次，离心合并有机相，于40 ℃旋转蒸发至2 mL，将样液转移至5 mL刻度试管中，并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶，合并洗涤液到刻度试管中，室温通氮浓缩至干。定量加入1.0 mL乙腈溶解残渣，加入2 mL环己烷旋涡混匀2 min后，2500 r/min离心3 min，将下层乙腈相过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3.蜂蜜

称取5 g试样（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心管中，加入10 mL水和25 mL乙酸乙酯，于旋涡混合器上混匀1 min，以3000 r/min离心5 min，将上层乙酸乙酯提取液收集于浓缩瓶中，残渣再加入20 mL乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯提取溶液。在50 ℃ 以下减压浓缩至约3 mL后转移至10 mL离心管中，用5 mL乙酸乙酯分两次洗涤浓缩瓶，合并洗涤液于离心管中，用氮气吹干。加1.0 mL乙腈溶解残渣，并过0.45 μm微孔滤膜后，供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

国标解读及注意事项

1.标准物质用甲醇配成100 μg/mL的标准储备液，在0 ℃～4 ℃冷藏避光保存，可使用3个月。

2.本方法中肉类和肠衣的提取净化方式为：二氯甲烷提取三次，无水硫酸钠除水，环己烷除脂；蜂蜜的的提取净化方式为：水溶解后，乙酸乙酯提取两次。三种基质均相当于5 g试料上机检测。

3.根据基质中含水量的多少，调整无水硫酸钠的用量。

4.本方法采用多次提取的方式提高目标化合物的回收率。

5.本方法使用基质曲线进行定量，还可以使用三种化合物相对应的同位素内标配制标准曲线，进行回收率的校正。

参考文献

GB 23200.94-2016 食品安全国家标准动物源性食品中敌bai虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法

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