为什么Wes/Jess的Western blot数据不被质疑

前言

       过去的一段时间里，Western blot数据被修饰，修改，拼接，重复使用等问题，导致数据可信度遭质疑，从而文章撤稿，基金撤回，成为ZG科学家内心隐隐的痛。

       如何实现Western Blot数据规范化管理，以及数据长久保存，以便随时提取数据，回应审稿人的质疑，同行的质疑，成为科研界急需解决的问题。

       Wes/Jess全自动定量western blot系统，前瞻性的解决了这些问题。

Wes/Jess技术及Compass软件的特点

       I.数据不可修改

       Wes/Jess Compass软件，符合FDA 21 CFR part 11审计追踪法规要求，保障数据不可修改，全程实验及结果可溯源。

       II.全程自动化标准化

       很多科学家重复使用Western Blot数据，是因为同一实验重复性差，万般无奈，只能将不同次实验拼接在一起。Wes/Jess全程自动化标准化，实现数据可重复，无需再拼接实验结果。

       III.全膜western Blot

       为避免作者通过剪膜来修改western blot结果，现越来越多的杂志，需要作者提供全膜的原始结果。而全膜孵育抗体，将会大幅度提高传统western blot抗体消耗，增加成本。Wes/Jess 所有实验均为全膜western，且通常只需消耗0.1-0.2ul抗体原液，大幅降低抗体成本消耗。

       IV.数据保存

       所有数据被压缩保存在数据库格式文件中，可以使用Compass软件打开，在任何时候，都可以随时提取数据。

案例分析

       现分享国际ding级期刊Nucleic Acids Research的文章：Combined deficiency of Senataxin and DNA-PKcs causes DNA damageaccumulation and neurodegeneration in spinal muscular atrophy，作者来自美国德克萨斯理工大学健康科学ZX医学院。

       慢性，低水平运动神经元生存基因（survival motor neuron (SMN)）是导致脊髓性肌萎缩（SMA）的重要因素。作者建立SMN缺失模型研究SMA发生的分子机制。文章中进行了大量的western blot实验。

结果：

1. 急性SMN缺失，引起非SMA分裂细胞DDR信号通路活化。

2. 急性SMN缺乏导致非SMA分裂细胞SETx的下调和RNA - DNA杂合物（R环）的积累。

3. 病人数据。慢性低水平SMN可引起SMA患者来源细胞SETX和磷酸dna-pkcs缺乏，R-环积聚和DNA损伤。

4. SMN或SETX在SMA患者细胞中的异位表达减少R-环积聚和挽救DNA损伤表型。

5.慢性低水平SMN可导致SMA小鼠脊髓神经元SETX缺乏、R-环积聚和DDR通路激活

6. SMN和SETX异位表达挽救SMA脊髓神经元DNA损伤和神经元变性

       文中，作者检测17个蛋白，包括内参蛋白Tubulin（55KD），SMN（40KD），DNAPKcs（450KD）及其磷酸化，CHK1（56KD）及其磷酸化，ATR（300KD）及其磷酸化，CHK2（62KD）及其磷酸化，BRCA1（220KD）及其磷酸化，ATM（350KD）及其磷酸化，H2Ax（15KD），rH2AX（15KD），SETX（35KD）。

       涉及多个200KD以上大分子量蛋白，和H2Ax小分子量蛋白检测。众所周知，大分子量蛋白质和小分子量蛋白质，是传统Western Blot技术的难题。

       作者在补充材料中提供了所有蛋白的全膜western blot结果。举几例：

       Wes/Jess实现了结果可重复，全膜，2-440KD分子量全覆盖，全程自动化，化学发光信号值定量，数据不可修改，数据溯源，是规范实验室Western Blot数据管理的新一代技术。

如需了解更多Wes/Jess技术，请联系ProteinSimpleZG

（来源：ProteinSimple）