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为什么Wes/Jess的Western blot数据不被质疑

ProteinSimple, a biotechne brand 2020-02-17

前言

       过去的一段时间里,Western blot数据被修饰,修改,拼接,重复使用等问题,导致数据可信度遭质疑,从而文章撤稿,基金撤回,成为ZG科学家内心隐隐的痛。

       如何实现Western Blot数据规范化管理,以及数据长久保存,以便随时提取数据,回应审稿人的质疑,同行的质疑,成为科研界急需解决的问题。

       Wes/Jess全自动定量western blot系统,前瞻性的解决了这些问题。

Wes/Jess技术及Compass软件的特点

       I.数据不可修改

       Wes/Jess Compass软件,符合FDA 21 CFR part 11审计追踪法规要求,保障数据不可修改,全程实验及结果可溯源。

       II.全程自动化标准化

       很多科学家重复使用Western Blot数据,是因为同一实验重复性差,万般无奈,只能将不同次实验拼接在一起。Wes/Jess全程自动化标准化,实现数据可重复,无需再拼接实验结果。

       III.全膜western Blot

       为避免作者通过剪膜来修改western blot结果,现越来越多的杂志,需要作者提供全膜的原始结果。而全膜孵育抗体,将会大幅度提高传统western blot抗体消耗,增加成本。Wes/Jess 所有实验均为全膜western,且通常只需消耗0.1-0.2ul抗体原液,大幅降低抗体成本消耗。

       IV.数据保存

       所有数据被压缩保存在数据库格式文件中,可以使用Compass软件打开,在任何时候,都可以随时提取数据。

案例分析

       现分享国际ding级期刊Nucleic Acids Research的文章:Combined deficiency of Senataxin and DNA-PKcs causes DNA damageaccumulation and neurodegeneration in spinal muscular atrophy,作者来自美国德克萨斯理工大学健康科学ZX医学院。


       慢性,低水平运动神经元生存基因(survival motor neuron (SMN))是导致脊髓性肌萎缩(SMA)的重要因素。作者建立SMN缺失模型研究SMA发生的分子机制。文章中进行了大量的western blot实验。

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结果:

1. 急性SMN缺失,引起非SMA分裂细胞DDR信号通路活化。

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2. 急性SMN缺乏导致非SMA分裂细胞SETx的下调和RNA - DNA杂合物(R环)的积累。

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3. 病人数据。慢性低水平SMN可引起SMA患者来源细胞SETX和磷酸dna-pkcs缺乏,R-环积聚和DNA损伤。

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4. SMN或SETX在SMA患者细胞中的异位表达减少R-环积聚和挽救DNA损伤表型。

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5.慢性低水平SMN可导致SMA小鼠脊髓神经元SETX缺乏、R-环积聚和DDR通路激活

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6. SMN和SETX异位表达挽救SMA脊髓神经元DNA损伤和神经元变性

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       文中,作者检测17个蛋白,包括内参蛋白Tubulin(55KD),SMN(40KD),DNAPKcs(450KD)及其磷酸化,CHK1(56KD)及其磷酸化,ATR(300KD)及其磷酸化,CHK2(62KD)及其磷酸化,BRCA1(220KD)及其磷酸化,ATM(350KD)及其磷酸化,H2Ax(15KD),rH2AX(15KD),SETX(35KD)。

       涉及多个200KD以上大分子量蛋白,和H2Ax小分子量蛋白检测。众所周知,大分子量蛋白质和小分子量蛋白质,是传统Western Blot技术的难题。


       作者在补充材料中提供了所有蛋白的全膜western blot结果。举几例:

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       Wes/Jess实现了结果可重复,全膜,2-440KD分子量全覆盖,全程自动化,化学发光信号值定量,数据不可修改,数据溯源,是规范实验室Western Blot数据管理的新一代技术。

如需了解更多Wes/Jess技术,请联系ProteinSimpleZG

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(来源:ProteinSimple)

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