在凝胶依然留有分子。
1、转膜时间偏短。
2、缓冲液的pH不在等电点周围,电荷不是Z大,缓冲液改成适合pH的。
3.滤纸太干。
4电路错误。
5.凝胶浓度太大。
6、转移缓冲液中的甲醇,从凝胶中洗掉阻滞蛋白,将甲醇除去,那么使转移效率提高,然而却使得与硝化纤维的结合效率下降。
7、在凝胶中沉淀蛋白,为了使转移效率提高,使用含SDS的缓冲液。然而却对某些抗体的结合反应产生影响和使得与硝化纤维的结合效率下降。
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