怎样选择(设计测序用引物?

测序用引物要求非常严格,不同于PR用引物。

(1)长度在15~25个碱基左右,一般选择20个碱基(根据GC含量作适当调整)

(2)3'端尽量选择G或C碱基

(3)Tm温度应选择50℃~70℃左右

(4)GC含量应选择在50%左右,尽量避开A、T、G、C的连续结构

(5）避开引物自身形成发夹结构或引物二聚体结构等复杂结构

(6）保证引物和模板匹配,特别是3端的几个碱基一定要匹配。同时必须严格保证引物和模板之间只能有一个结合位点