活细胞怎么计数？

用台盼蓝拒染法计数活细胞:
1. 彻底混合细胞悬液,取100礚样本至一支试管中.
2. 台盼蓝染色有两种方法.一是首先用细胞培养液稀释细胞样本,然后用台盼蓝溶液(产品号 #07050) 1/2稀释样本（细胞和台盼蓝的稀释比为1:1）.或者直接用台盼蓝溶液稀释样本.
例如：1/40稀释样本
加入50礚 细胞悬液至950礚 IMDM+2% FBS (1/20 稀释),混合,然后取100礚稀释的细胞悬液加入100礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).或取20礚细胞悬液加入780礚台盼蓝溶液中(终稀释度为1/40).
3. 涡悬振荡,混合稀释的细胞样本.
4. 血细胞计数器的准备：首先用酒精清洁其小室和盖玻片,然后用脱脂绵擦干.
5. 仔细的将盖玻片覆盖两个小室.
6. 用微量移液器或毛细管吸取稀释的样本.
7. 用微量移液器或毛细管将样本充满两个小室.不要过满或不足.
8. 计数4个大方格中细胞核的总数(1x1x0.1mm)或>100个细胞.分别死细胞和活细胞.死细胞染成蓝色的死细胞(因为细胞完整性破坏,细胞吸收台盼蓝),活细胞透明有折光（未染色）.
9. 活细胞计数按以下方法计算：
每个方格中活细胞总数平均值x稀释倍数x104= 活细胞数/mL