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LCS小课堂之液体闪烁计数中的统计学

珀金埃尔默 2020-04-29 10:51:03 424  浏览
  • 我们在使用液体闪烁计数系统的核计数中采用统计学方法,因为放射性核素衰变的本质是其可在任一时间释放β粒子(随机衰变)。虽然我们不能确定核衰变会在什么时候发生,但我们可使用统计学方法描述一个样品中所有核衰变的平均行为。为了应对放射性核素的随机衰变行为,我们采用了计数统计方法。统计可用来表示在某一限定的置信区间内得到给定计数的概率,一般使用 %2σ(%2s标准偏差)来表示。

    下面我们可通过对单一放射性样品计数十次来简单明了的说明液体闪烁计数中的统计学方法。该实验的数据列于表 1 中。我们可明显看到,任何一次计数的 CPM 结果都不相同(随机衰变)。我们怎样才能获得这 10 次计数的统计数据呢?如果我们进行基本统计,则这些数值的分布可表示为正态分布或高斯分布。

    表 1. 10次样品计数的统计分析

    这些数据可通过计算两个参数来描述:平均值和标准偏差。平均值 () 被定义为 CPM 的总和除以被计数样品的计数次数(i),表示为。因此从表 1 来看,466148 CPM/10 = 46615,这就是平均值  CPM。接下来必须获得这 10 个样品计数的标准偏差。标准偏差可通过下面的公式获得:

    因此,该样品计数十次的计数结果表示为(平均值)46615±S.D. 或 46615±102 CPM。现在我们可以计算标准偏差,但 S.D. (±102 CPM) 对于核计数的真正意义是什么?我们可通过图 1 来清楚说明,图中显示了重叠在实际计数数据上的正态分布(高斯分布)(表 1)。计数数据以柱状图表示。

    图 1. 放射性样品计数十次的正态分布和计数数据

    正态分布曲线通过下面的公式计算得到:

    因此,发生在平均值的 +s 范围内的真实计数的概率是68%。68% 称为针对 s(标准偏差)的置信水平。由于核计数需要高于 68% 的置信水平,因此我们采用 2s 值,该值定义为 95.5% 的置信界限。

    那么,这些值可如何用于核计数中呢?根据基本统计方法,我们知道预期的标准偏差等于总计数数量的平方根。这是计数统计计算的主要公式。

    计数统计计算

    如上所述,标准偏差可按样品检测的总计数数量的平方根来计算。该结果的置信界限为 68%。但核计数使用 2s 值(95.5% 置信界限)。典型的计算如实例 2 所示。

    实例 2:如果在 1.0 分钟内进行了 9500 次计数,那么 2s 值等于多少?

    因此,在 95.5% 的置信界限内,计数的统计结果(实例 2)可表示为 9500±195 次计数。这一表达结果的方法相当笨拙(因为可能获得非常多的数字)。为更方便起见,我们计算了 %2s值。%2s 值可根据公式1或者公式 2(公式 1 的数学简化)计算得到。实例 2中数据的%2s 值显示在实例 3中。

    实例 3:样品计数的 %2s 计算

    因此,Z终结果可表示为 9500 次计数 ± 2.05%,置信水平为 95.5%。

    计数率的统计分析

    因为大多数核计数方法是分析 CPM 值而不是样品的总计数,所以确定计数率的统计值很重要。以计数率为参考将如何影响计数的统计数据?如果现在对同一样品计数三分钟,则总计数数量增加了三倍。样品总体计数从 9500 次增加到 28500 次,这增加了测量的准确性。28500 次总计数的 2s 值 (338) 的百分比更小,由此可指示出准确度得到了提升。

    实例 4:计算计数率的 2s 值

    因此,Z终结果可表示为 9500 ± 113 CPM。现在,我们已经计算了计数率的 2s 值,那么该如何计算 %2s(使用核计数仪分析样品时通常打印输出的值)?

    %2s可使用公式 3计算。

    实例 5:计数率为 9500 CPM、计数时间为 3 分钟的样品的 %2s 计算。

    因此,对样品计数三分钟与计数一分钟相比较,%2s 从2.05%(实例 3)降低至 1.18%(实例 5)。这一数值 (%2s) 与总计数和计数时间成反比。

     

    那么这些参数是如何在液体闪烁计数中使用的呢?

    在珀金埃尔默的 Tri-Carb & Quantulus 和 MicroBeta 仪器中,终止样品计数的方法通常有两种。diyi种方法称为预设时间。在该方法中,系统在到达用户设定的计数时间后停止样品计数。第二种方法是基于特定 %2s 值终止计数,所有的样品计数都具有相同的统计精确度。我们可以通过公式 3和对样品的统计精确度来反向推导对样品计数所需要的时间。


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LCS小课堂之液体闪烁计数中的统计学

我们在使用液体闪烁计数系统的核计数中采用统计学方法,因为放射性核素衰变的本质是其可在任一时间释放β粒子(随机衰变)。虽然我们不能确定核衰变会在什么时候发生,但我们可使用统计学方法描述一个样品中所有核衰变的平均行为。为了应对放射性核素的随机衰变行为,我们采用了计数统计方法。统计可用来表示在某一限定的置信区间内得到给定计数的概率,一般使用 %2σ(%2s标准偏差)来表示。

下面我们可通过对单一放射性样品计数十次来简单明了的说明液体闪烁计数中的统计学方法。该实验的数据列于表 1 中。我们可明显看到,任何一次计数的 CPM 结果都不相同(随机衰变)。我们怎样才能获得这 10 次计数的统计数据呢?如果我们进行基本统计,则这些数值的分布可表示为正态分布或高斯分布。

表 1. 10次样品计数的统计分析

这些数据可通过计算两个参数来描述:平均值和标准偏差。平均值 () 被定义为 CPM 的总和除以被计数样品的计数次数(i),表示为。因此从表 1 来看,466148 CPM/10 = 46615,这就是平均值  CPM。接下来必须获得这 10 个样品计数的标准偏差。标准偏差可通过下面的公式获得:

因此,该样品计数十次的计数结果表示为(平均值)46615±S.D. 或 46615±102 CPM。现在我们可以计算标准偏差,但 S.D. (±102 CPM) 对于核计数的真正意义是什么?我们可通过图 1 来清楚说明,图中显示了重叠在实际计数数据上的正态分布(高斯分布)(表 1)。计数数据以柱状图表示。

图 1. 放射性样品计数十次的正态分布和计数数据

正态分布曲线通过下面的公式计算得到:

因此,发生在平均值的 +s 范围内的真实计数的概率是68%。68% 称为针对 s(标准偏差)的置信水平。由于核计数需要高于 68% 的置信水平,因此我们采用 2s 值,该值定义为 95.5% 的置信界限。

那么,这些值可如何用于核计数中呢?根据基本统计方法,我们知道预期的标准偏差等于总计数数量的平方根。这是计数统计计算的主要公式。

计数统计计算

如上所述,标准偏差可按样品检测的总计数数量的平方根来计算。该结果的置信界限为 68%。但核计数使用 2s 值(95.5% 置信界限)。典型的计算如实例 2 所示。

实例 2:如果在 1.0 分钟内进行了 9500 次计数,那么 2s 值等于多少?

因此,在 95.5% 的置信界限内,计数的统计结果(实例 2)可表示为 9500±195 次计数。这一表达结果的方法相当笨拙(因为可能获得非常多的数字)。为更方便起见,我们计算了 %2s值。%2s 值可根据公式1或者公式 2(公式 1 的数学简化)计算得到。实例 2中数据的%2s 值显示在实例 3中。

实例 3:样品计数的 %2s 计算

因此,Z终结果可表示为 9500 次计数 ± 2.05%,置信水平为 95.5%。

计数率的统计分析

因为大多数核计数方法是分析 CPM 值而不是样品的总计数,所以确定计数率的统计值很重要。以计数率为参考将如何影响计数的统计数据?如果现在对同一样品计数三分钟,则总计数数量增加了三倍。样品总体计数从 9500 次增加到 28500 次,这增加了测量的准确性。28500 次总计数的 2s 值 (338) 的百分比更小,由此可指示出准确度得到了提升。

实例 4:计算计数率的 2s 值

因此,Z终结果可表示为 9500 ± 113 CPM。现在,我们已经计算了计数率的 2s 值,那么该如何计算 %2s(使用核计数仪分析样品时通常打印输出的值)?

%2s可使用公式 3计算。

实例 5:计数率为 9500 CPM、计数时间为 3 分钟的样品的 %2s 计算。

因此,对样品计数三分钟与计数一分钟相比较,%2s 从2.05%(实例 3)降低至 1.18%(实例 5)。这一数值 (%2s) 与总计数和计数时间成反比。

 

那么这些参数是如何在液体闪烁计数中使用的呢?

在珀金埃尔默的 Tri-Carb & Quantulus 和 MicroBeta 仪器中,终止样品计数的方法通常有两种。diyi种方法称为预设时间。在该方法中,系统在到达用户设定的计数时间后停止样品计数。第二种方法是基于特定 %2s 值终止计数,所有的样品计数都具有相同的统计精确度。我们可以通过公式 3和对样品的统计精确度来反向推导对样品计数所需要的时间。


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Agitek射频仪器小课堂之网络分析仪篇

作为一名射频工程师或准射频工程师,不仅要掌握各种设计软件,还要熟练使用各种测试仪器,因为做出的产品能不能达到设计指标,能不能实现设计的功能,ZH都需要通过射频测试仪器来验证。

Agitek射频仪器小课堂将带大家详细盘点常用射频微波测量仪器的种类和用途!今天安泰测试先给大家分享一下射频仪器中比较高端比较昂贵的仪器——网络分析仪:

网络分析的“网络”是指射频电路和射频信号通道,包含射频、微波电路,由信号通道和部件构成,包含各类电路元器件,不要与IT网络和电力网络混淆。

基本功能是电路参数分析,分析S参数(散射参数),分析信号(电磁波)在网络中的传输和反射参数,常用参数格式:幅度(损耗、增益、驻波…)、相位、时延、阻抗。

网络分析仪分为矢量和标量两种类型,矢量网络分析仪包含幅度和相位等所有信息的网络参数,标量网络分析仪不包含相位、时延等信息。

一、测量应用领域:

放大器、同轴电缆、功分器、合路器、天线、耦合器、滤波器、隔离器、分支分配器、晶体、声表等;

二、高端矢量网络分析仪的功能:

高精度矢量S参数测量(增益、插损、驻波、相位、延时...)

频谱仪选件可选内置频谱仪功能

时域测量

变频矢量测量

相参信号产生和调节

变频群时延测试

天线测试

内置脉冲源、调制器,进行脉冲测试

真差分测试

噪声系数测量

去嵌入校准

外控扩展模块进行THz测量

三、网络分析仪品牌推荐(排名不分先后):

是德科技(Keysight)

泰克(Tektronix)

罗德与施瓦茨(R&S)

安立(Anritsu)

中电仪器(Ceyear)

创远仪器(TRANSCOM)

普源精电(RIGOL)

如果大家在选择网络分析仪过程中遇到什么问题,欢迎咨询安泰测试,安泰有专业的技术团队,能够快速、准确的帮您选择合适的网络分析仪。


2021-07-06 10:23:48 305 0
安泰小课堂之四线法测量介绍

四线测试法被认为是目前为止zui好的消除引线电阻引入误差(或将其将至最小的)的测试方案,作为初学者来说,除了了解测试方法,了解它的原理及优势也是非常有必要的,今天安泰测试就给大家介绍一下四线法测量的原理及特点:

(一)、四线法原理介绍

四线法,我们也可以称为四端点测量技术、开尔文测量法,是一种电子线路中的阻抗测量法,主要用于电阻阻值的精确测量。

(二)、二线法测量的局限

当我们在使用二线法测量电阻时,根据欧姆定律R=U/I,不论是近距离还是远距离测量阻值,测量结果都会受到导线电阻的影响,导致电压下降,远距离测量时由于导线更长造成的压降(电压下降)更大而造成不可忽略的影响。在实际测量中受限于某些条件而只能远距离测量电压,此时由于远距离测量中大电流流经长导线造成了不可忽视的压降,而对测量电阻阻值造成影响。

(三)、四线法如何精准测量

四线式测量方法示意图

四线法测量由额外导线引至伏特计,则可避免测量电阻时受到导线电阻造成的压降影响。由于伏特计内电阻极大,流经伏特计的电流值相比于流经待测电阻电流值小到可忽略,所以额外导线产生的压降不会对测量结果造成影响。此时所测电压与安培计所测电流之比即可近似为被测电阻阻值。

(四)、四线法测量的优点

1、导线电阻产生的电压差几乎为零,不影响电压测量结果。

2、由于仅有极小部分的电流(小到可忽略)流经伏特计,故也不影响电流测量结果。

3、待测电阻为低电阻,同样可精准测量。

你对四线制测量方法了解多少呢?你会使用四线制测量吗?如果您在用四线制测量过程中有什么问题,欢迎访问安泰测试网。


2021-09-26 15:16:16 222 0
频谱分析仪维修小课堂之频谱仪常见故障有哪些

频谱分析仪是射频微波应用领域常用的测试仪表,通过频谱仪的测试,可以得到信号很多重要的性能参数,如信号频率,信号功率,信号带宽,杂散性能等。对于一个射频工程师来讲,经常使用频谱分析仪,难免会遇到频谱分析仪出现故障的时候,今天安泰测试就给大家分享一下频谱仪常见故障有哪些,以及使用注意事项。

频谱仪TG、信号源输出口、功率探头等反向保护能力差(10~15dBm,电压0V或10V)。大多模块与整机都是双工模式(上下行收发使用不同的频率,收发同时进行),所以,西安安泰频谱分析仪维修中心小编提示大家,在测试双工类放大器模块或设备时,为了防止反馈信号对仪器的损坏,必须在信号源、频谱仪跟踪源(TG)等输出口串接相应频段的隔离器或合适的衰减器,且要定期对隔离器的好坏进行检查,保证隔离器的反向衰减≥20dBm。需要注意隔离器只能隔离高频,不能隔直流。要清楚区分隔离器好坏的检查方法。

1.仪器端口的保护。

2.在仪器的输入输出端口拧接电缆、转接头、隔离器或衰减器时,要注意对端口的保护,以免造成接头松动或接触不良,从而影响测量精度。网络分析仪更应注意接头的维护。

3.电源、仪器、HPIB、GPIB电缆机、鼠标键盘等不可带电进行插拔或搬动,要在开机前连接上,若需打印可先用软盘保存,再在电脑上打印。

4.仪器的左右,特别是后面部分,要与其它物体保持一定的距离来散热,一般10cm即可。电源和其它带电和带磁性的物体不要靠近频谱仪。

5.有些仪器在待机状态,内部部分电路并未断电,西安安泰频谱分析仪维修中心小编建议大家,长时间不用或下班时必须拔电源线或给电源插座断电关机,如E4432B信号源、FSP频谱仪、频率计。在施工现场,经常发现有未断电关机的现象。

6.为了保证测试的准确度,仪器在使用或校准前,必须预热半小时以上,并在使用前对仪器状态进行检查并记录,以便及时发现问题,提供可追溯性。在频谱仪使用过程中,要合理设置参数。

7.所有仪器设备应工作于适宜的温湿度环境下(温度范围0~+50℃,湿度小于85%为宜),避免阳光直射且远离震源、水源和腐蚀性气体等。

8.另外,有些仪器设备有其特殊的维护及使用要求,在使用之前都应进行了解,并在操作过程中加以注意,只有这样才能做到防患于未然。

安泰测试维修中心拥有专业培训的维修工程师,专业维修美国Agilent、TEK、FLUKE、R&S、KEITHLEY、安立等公司,已不提供维修以及在修但是过了质保期的各种示波器、频谱仪、网络分析仪、逻辑分析仪、功率计、发射机、接收机、信号源、各种型号的探头、函数信号发生器、校准源等进口仪器仪表,如果大家在使用频谱分析过程中有什么问题,欢迎访问安泰测试网。


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【THUNDER小课堂】肿瘤细胞中有丝分裂纺锤体的成像

本文展示了如何使用THUNDER Imager Tissue和Large Volume Computational Clearing(LVCC)实现尤文(尤因)肉瘤细胞中有丝分裂纺锤体的更多细节观察,从而协助本研究的进行。活细胞成像等技术在了解肿瘤进展和转移研究中至关重要。真核细胞中的有丝分裂纺锤体由中空的微管组成。它在有丝分裂期间的细胞内重复染色体分离和分裂细胞细胞骨架结构的构建过程中发挥着重要的作用。在尤文肉瘤这一类的肿瘤细胞中,有丝分裂障碍的触发因子可通过检查有丝分裂纺锤体的机能障碍来得以确认。


简介

使用荧光显微镜可以研究肿瘤形成和进展过程中组织及细胞内部发生的变化。像活细胞成像这样的技术对更加深入地了解肿瘤进展和转移是至关重要的。

在真核细胞中,由中空微管组成的有丝分裂纺锤体,有助于构建复制细胞的细胞骨架结构,并在有丝分裂过程中将复制的染色体从原始细胞中分离出来。在尤文肉瘤这一类的肿瘤细胞中,有丝分裂障碍的触发因子可通过检查有丝分裂纺锤体的机能障碍来得以确认[1]。

肉瘤是肌肉或骨骼等结缔组织中形成的一类肿瘤。尤文肉瘤和横纹肌肉瘤,分别生长于骨骼和肌肉中,是一种倾向于发生在骨骼生长活跃区域附近的儿科肿瘤。除了手术和化疗之外,电离辐射也被用于治疗这类肿瘤,但这可能会导致生长中的骨骼受到永jiu性损伤,包括不对称生长停滞、胫骨畸形及骨折概率增加等。骨骼损伤的严重度在很大程度上与骨骼接受的辐射剂量成正比。因此,我们有理由认为,选择性放射致敏肿瘤组织的策略可降低实现局部控制所需的辐射剂量,并能最大限度降低对邻近健康组织造成的间接损伤

运用体外研究和小鼠异种移植模型系统,对使用mRNA合成抑zhi剂光神霉素A预处理,可以通过改变辐射损伤的转录反应实现选择性放射致敏EWS:Fli1+肿瘤细胞的假设进行了验证[2]。结果表明,光神霉素A可以通过抑zhi参与DNA损伤修复相关基因的转录,使EWS:Fli1+细胞在体内外显著放射增敏,导致肿瘤细胞程序性死亡[2]。

使用THUNDER Imager Tissue和Large Volume Computational Clearing(LVCC)可以揭示肉瘤细胞中有丝分裂纺锤体的更多细节,协助癌症研究人员获得更有用的见解。


挑战

在有丝分裂纺锤体成像中,可对其实现快速成像,并获得清晰的高对比度3D成像以清晰展示重要细节的解决方案最为实用。传统的宽场显微成像速度快,检测灵敏度高,但不幸的是对于厚样本的成像通常会出现失焦不清晰或模糊的情况,这会降低对比度[3]。要阐明有丝分裂的不稳定性在癌症等复杂疾病中的作用,这需要在同一样本中进行多个关联生物学标记


方法

该研究中使用了尤文肉瘤细胞(SK-ES-1)。对这些细胞进行α-微管蛋白(Clone YL1/2 Thermo-Fisher Scientific # MA1-80017,按1:500比例稀释/ Dylight 488偶联驴抗大鼠 Thermo-Fisher Scientific #SA5-10026)、γ-微管蛋白(Clone TU-30,AbCam # ab27074,按1:200比例稀释/Dylight 550偶联驴抗小鼠 Thermo-Fisher Scientific # SA5-10167)和DNA(Hoechst 33342蓝)进行染色。染色后,使用介质ProLong Glass Antifade(Thermo-Fisher Scientific #P36981)进行盖玻片封片,并通过使用63×/1.4 NA(数值孔径)的油镜进行THUNDER Imager Tissue成像。图像采集使用大体积成像解析(LVCC)[3]模式,并生成最大化投影图像数据


结果

在有丝分裂过程中,α-微管蛋白(绿色)形成有丝分裂纺锤体,染色单体(蓝色)会附着在有丝分裂纺锤体上,而γ-微管蛋白(红色)集中定位在分裂细胞中的纺锤极上。通过THUNDER技术可观察到肉瘤细胞中有丝分裂纺锤体的更多细节。清晰的图像可以展示清晰的结构,以便进行分割和进一步的分析。

图1:尤文肉瘤细胞SK-ES-1 α-微管蛋白(绿色)、γ-微管蛋白(红色)和DNA(蓝色)染色后的最大化投影:原始图像数据(左)和THUNDER LVCC模式成像数据(右)。


 结 论 

THUNDER Large Volume Computational Clearing(LVCC)[3]进行尤文肉瘤细胞中的有丝分裂纺锤体成像时可显著增强对比度。与传统的宽场成像相比,其可展示细胞中有丝分裂纺锤体的更多细节

References:

1.S. Rello-Varona, D. Herrero-Martín, L. Lagares-Tena, R. López-Alemany, N. Mulet-Margalef, J. Huertas-Martínez, S. Garcia-Monclús, X. García del Muro, C. Muñoz-Pinedo, O. Martínez Tirado, The importance of being dead: cell death mechanisms assessment in anti-sarcoma therapy, Frontiers in Oncology (2015) vol. 5, p. 82, DOI: 10.3389/fonc.2015.00082.

2.M. Yun Lin, T.A. Damron, M.E. Oest, J.A. Horton, Mithramycin A Radiosensitizes EWS:Fli1+ Ewing Sarcoma Cells by Inhibiting Double Strand Break Repair, Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys. (2021) vol. 109, iss. 5, pp. 1454-1471, DOI: 10.1016/j.ijrobp.2020.12.010.

3.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note : THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.


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【THUNDER小课堂】脑神经发育

整个小鼠胚胎的图像:(左)原始宽场成像结果和(右)应用Large Volume Computational Clearing(LVCC)后的成像结果。图片来源:A. Popratiloff和Z. Motahari,美国乔治·华盛顿大学。


本文介绍了如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)对小鼠胚胎快速、高对比度成像,实现了对轴突生长和脑神经发育的研究。许多在发育早期阶段损害神经回路发育的遗传性疾病被认为会对行为造成干扰。用小鼠模型研究早期神经发育的细胞变化、定义与人类疾病相似的行为及潜在发育机制,是非常困难的。而鉴别发育的神经元回路中三叉神经(其参与面部感觉和运动机能)轴突生长的早期分化,使得这些困难迎刃而解。


人们普遍认为,很多遗传性疾病都通过损害神经回路发育的早期阶段来对行为产生干扰[1]。事实证明,在模型动物中分辨早期神经发育中细胞的此类变化具有一定的难度。用与人类遗传性疾病中临床显著缺陷相似的基因突变小鼠模型来定义行为、神经回路和潜在发育机制,是非常困难的[1]。检测单个神经元初始分化中的变化难以实现。这些挑战可通过确定发育的神经回路中三叉神经这一关键组分的轴突生长的早期分化来解决[1]。通过着眼于参与面部感觉及运动机能如哺乳、进食、咬、咀嚼和吞咽等的三叉神经(脑神经V),以及轴突生长和原生传导通路,可以对使用组织学处理可能会缺失的三维环境进行研究[1]。本文介绍如何使用THUNDER Imager 3D Cell Culture和Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]对小鼠胚胎快速、高对比度成像,以帮助进行脑神经发育研究。


如要以实用高效的方式对整个小鼠胚胎成像,快速、清晰的高对比度3D成像解决方案,对于重要细节展示和解析大有益处。相较于激光共聚焦成像,可在很短的时间内一次性采集到完整胚胎的成像结果。传统宽场显微成像速度快,检测灵敏度高,但是对厚标本的成像,如小鼠胚胎,通常会由于非焦平面信号的影响,呈现模糊的成像结果,降低图像对比度[2,3]。


使用THUNDER Imager 3D Cell Culture对小鼠胚胎成像。使用抗βIII微管蛋白(Tuj1)抗体对胚胎的神经系统和脑神经进行染色。结合BABB透明化处理,即可对整个胚胎中的神经系统进行三维结构成像。图1中的图像使用数值孔径(NA)0.75、工作距离700μm的20x多浸液物镜采集。该图像由32个视野拼接组成,成像深度为672 μm(337层切),采集了完整的胚胎结构。数据采集总时长为18分钟。


通过LVCC和Instant Computational Clearing(ICC)将宽场成像固有的非焦面模糊信号清除[2,3]。之后,再使用徕卡自适应式反卷积技术来增强三维特征结构的分辨率[4]。这种成像模式便于观察胚胎的神经结构以及胚胎的整体布局中更有价值的神经元定位

图1:展示整个小鼠胚胎的俯视图,显示原始数据(A)与应用LVCC后(B)的差异。根据相对物镜深度进行颜色标识的胚胎的角度视图,其中zui大深度为672 μm。C)应用LVCC后的脑部侧视图,显示了沿Z轴方向的精密细节。图片来源:Anastas Popratiloff博士和Zahra Motahari博士,乔治·华盛顿大学纳米制造与成像中心(GWNIC),美国华盛顿特区。

结论

与传统的宽场成像不同,THUNDER技术Large Volume Computational Clearing(LVCC)[2,3]在对小鼠胚胎中的脑神经发育成像时,显著增强了图像对比度,对精密细节有更好的解析。


References:

1.Z. Motahari, T.M. Maynard, A. Popratiloff, S.A. Moody, A.-S. LaMantia, Aberrant early growth of individual trigeminal sensory and motor axons in a series of mouse genetic models of 22q11.2 deletion syndrome, Human Molecular Genetics (2020) vol. 29, iss. 18, pp. 3081-3093, DOI: 10.1093/hmg/ddaa199.

2.J. Schumacher, L. Bertrand, THUNDER Technology Note: THUNDER Imagers: How Do They Really Work? Science Lab (2019) Leica Microsystems.

3.L. Felts, V. Kohli, J.M. Marr, J. Schumacher, O. Schlicker, An Introduction to Computational Clearing: A New Method to Remove Out-of-Focus Blur, Science Lab (2020) Leica Microsystems.

4.V. Kohli, J.M. Marr, O. Schlicker, L. Felts, The Power of Pairing Adaptive Deconvolution with Computational Clearing: Technical Brief, Science Lab (2021) Leica Microsystems. 


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本文讨论如何通过使用Instant Computational Clearing(ICC)的THUNDER Imager 3D Assay比传统宽场显微镜更加清晰地观察小鼠脑黑质中的D2多巴胺受体(D2R)。研究人员还可以使用THUNDER Imager优化脑样本的抗体染色。D2R是一种突触后受体,可在纹状体中高度表达。D2R激活会导致与细胞分化、生长、代谢等相关的信号通路。D2R在多巴胺能神经传递和运动控制中也发挥着重要的作用。这种类型的神经科学研究旨在更好地理解基因表达如何调控帕金森病、肌张力障碍、舞蹈症和精神错乱等疾病。

简  介  

D2多巴胺受体(D2R)是一种突触后受体,其在纹状体中高度表达,D2R激活会导致与细胞分化、生长、代谢及凋亡等相关的信号通路。D2R在多巴胺能神经传递和运动控制中也发挥着重要的作用。神经科学研究的目的是全方位了解基因表达的改变如何调控帕金森病、肌张力障碍、舞蹈症、嗜睡症、强迫症、精神错乱和情绪不稳定等疾病引发的认知功能障碍。本研究对小鼠脑部黑质区[3]神经元[1,2]中的D2多巴胺受体表达水平进行了检测。使用传统的荧光宽视场成像时,图像结果可能非常模糊,因此,通常会使用共聚焦显微镜来代替[4]。研究结果显示,与传统宽场显微镜相比,通过使用Instant Computational Clearing(ICC)的THUNDER Imager 3D Assay能更加清晰地观察到小鼠脑黑质致密区的D2多巴胺受体(D2R)


挑 战  

在这种神经科学研究中,能够快速筛查脑部样本的成像解决方案会非常有用。高质量的图像对于清晰解析被染色的多巴胺受体也必不可少。较厚的样本需要以良好的对比度对其内部深处进行成像。宽视场显微镜成像快速,并具有较高的检测灵敏度,但由于非焦平面的信号干扰,通常会在厚样本上观察到模糊信号,从而显著降低图像的对比度[5,6]。


方 法  

本研究中使用了小鼠大脑黑质区样本,对其进行免疫染色,以显示D2多巴胺受体(D2R)(红色)、神经元(TH抗体,绿色)和细胞核(DAPI,蓝色)。使用倒置的复合显微镜平台THUNDER Imager 3D Assay对脑样本进行了成像,并应用了即刻成像解析(ICC)。


结 果  

在本研究中,ICC后的THUNDER图像(见图1)中实时显示了小鼠脑样本深处的清晰细节,且无任何离焦模糊。


图1:显示D2R(红色)、CA神经元(绿色)和细胞核(蓝色)的小鼠脑部图像。

A) 原始宽场数据和 B) 应用ICC后的数据。

图片来源:Qi Wang博士,美国德克萨斯州休斯顿贝勒医学院。


结 论

与传统的宽场成像结果相比,THUNDER图像可以更清晰地显示被染色受体在脑部的位置。



2023-07-17 14:27:23 124 0
干货| Joe Flow的流变学小课堂

锥板、平板和同轴圆筒?选择的烦恼!

       由于现在流变仪用户通常会拥有多个测试夹具,可以从流变专业角度表征大部分材料。但是,选择正确的测夹具应该遵循什么标准呢?

       选择Z合适的测试系统,需要考虑下列问题:

       样品稠度如何?位于流变之路的哪一段?

       有无颗粒,粒径大小?

       样品量有多少?

       容不容易清洗?

       样品发生沉降或溶剂是否挥发?

       不同测试系统的优缺点?


       样品稠度?

       表1 给出了从低粘度液体到固体不同材料的总览和大致分类。每一列给出Z通用测试类型和推荐测试夹具。

       样品粘度越低,测试转子的表面积应该要越大。

       低粘度样品通常使用同轴圆筒测试系统测试。在高剪切速率下,离心力导致测试间隙中产生湍流(Taylor 旋涡),使得表观粘度增加。因此,不应该超过临界剪切速率。

       我们的推荐:越是粘性的材料,更应该采用类似锥板或平板测试夹具。



       有无颗粒,粒径大小?

       测试系统的选择也依赖于样品中颗粒的Z大粒径。测试间隙应该足够大,保证颗粒之间无互相干扰。因此,测试间隙应该至少大于Z大粒径的5 倍(10 倍更好)。

       这对锥板夹具更为关键,为防止锥和底板发生摩擦,在锥顶端打磨掉一定的高度,成为平台。图2 显示通用锥板的间隙值。

       如果样品中含有颗粒,会在顶端发生聚集,产生不真实的结果。

       如果样品中包含大颗粒,应该使用平行板夹具。测量间隙可以根据需要设定(推荐: 0.25 mm ~ 2 mm)。


       有多少样品可用于测试?

       有时由于只有少量样品而限制了测试夹具的选择,因而无法选择同轴圆筒测试系统。

这种情况下,推荐使用锥板或平行板夹具,比如,只有0.09ml样品,可采用CP40-0.3(直径: 40 mm, 角度: 0.3°)。


       清洗是否困难?

       如果测试结束后测试系统难以清洗,可更换为平行板或锥板,同轴圆筒测试系统清洗相对困难。

所有类型的测试系统都有一次性配件,可抛弃或者单独清洗,一次性配件是固化过程测量所需要的。


       样品是否会沉淀或挥发?

       样品含有溶剂,若使用平行板,锥板或双间隙系统,样品可能在边缘变干,导致测试的粘度偏高。

       因此可能的话,请使用同轴圆筒系统,即使样品表面变干,也不影响测试结果。

       当使用锥板和平行板测试系统时,有以下几种方法防止样品挥发变干:

       使用低粘度硅油涂在样品周围或表面

       使用防挥发罩,形成溶剂的饱和蒸气压

       如果使用帕尔贴上控温罩,可以使用专用的防挥发模块,达到Z大程 度的密封和减少样品裸露面积。

       如果样品发生沉降,由于只测试了液相,样品粘度可能偏低,对此类样品推荐使用同轴圆筒系统。


      不同测试系统的优缺点?



       特殊情况解决方案

       如果样品滑移,应该使用磨砂或刻痕夹具,对挑战性样品需要特殊材质的夹具。如果样品中颗粒粒径大于1mm,推荐使用球型系统或桨式转子。

       如果使用特殊系统,每次都采用相同的方法是很重要的,以获得可以比较的结果。



2020-01-14 17:18:04 272 0
原子荧光小课堂|钢铁行业中重金属污染及检测技术

钢铁行业虽未被列入ZD重金属防控行业,但因其落后的冶炼、涂镀工艺以及附属的采矿选矿、铁合金等带来重金属的污染依然不容忽视。因此在十三届全国人们代表大会上就有代表提出要推进钢铁等行业的改造,施行高污染排放标准并且限期达标。今天金索坤和您聊一聊钢铁工业中重金属污染以及主要的检测技术。

重金属污染特点

重金属污染与其他污染物相比,具有三个显著的特点:一为毒性,二为富集性和滞后性,三为难降解和难治理性。它的特点使得其对环境污染Z终造成对人健康的严重危害,其中对人体危害Z大的为Pb(铅)、Hg(汞)、As(砷)、Cd(镉)、Cr(铬) 5 种。其中工业重金属污染大多通过废气、废水、固体废物以及产品进入环境,通过在空气、水域、土壤、生物体中迁移,在植物、动物和人体中富集,由于难以降解,从而对环境和人的健康造成很大的危害,产生不可逆转的影响。

钢铁企业重金属污染物的来源

钢铁企业重金属元素主要由原(辅助)料、燃料带入,在高温烧结、冶炼、轧制过程中,随着废气、废水.固体废物,产品与副产品排出;另外原(辅助)料,燃料的转运.破碎.堆存(储存)中散逸烟(粉)尘也携带微量重金属元素。钢铁企业排放物中的重金属元素的量和种类取决于原(辅助)科的成分和组成.燃科的种类、成分和组成。

钢铁企业重金属污染物的检测

钢铁行业中对人体危害较大的重金属元素主要为Pb(铅)、Hg(汞)、As(砷)、Cd(镉)、Cr(铬) 5 种,其中对人体和环境危害Z大的主要为砷、汞,对于这两种的元素检测主要是应用原子荧光光谱法,其原理是:其中检测这五种重金属元素Z常用采用的方法的原理分别为:

试样在一定酸度下与硼氢化钾溶液通过氢化物发生器产生氢化物,随载气进人石英管原子化,在待测元素的特征波长处测定其中荧光强度,将测得的试液的荧光强度与标准溶液的荧光强度相比较,得出试液中待测元素的含量。(SN/T 2680-2010 铁矿石中砷、汞、镉、铅、铋含量的测定 原子荧光光谱法,GB/T 20127.2-2006 钢铁及合金 痕量元素的测定 第2部分氢化物发生-原子荧光光谱法测定砷含量)

从钢铁工业中重金属的检测方法看出原子荧光光度计在钢铁检测中发挥重要作用。北京金索坤技术开发有限公司作为市面上唯yi一家只专注原子荧光光度计的研发以及生产的高薪技术企业会一如既往的为原子荧光技术的发展探索乾坤,用更加优质GX的原子荧光光度计和其他各种检测仪器一起为钢铁工业的检测贡献力量.

新产品SK-盛析原子荧光光度计有以下优势:

1)采用与ICP-MS相同的连续进样方式,提高稳定性及测试效率,30s/3次数据。

2)无需动力,自动排废,提高反应稳定性,精简装置。

3)电路上增加分道信号控制模块,可保证双道同测砷锑及砷汞同测时,效果更佳。

4)氩气流量采用进口质量流量计的数字控制方式,提高仪器在长时间工作下的稳定性

5)新增添了审计追踪功能,有效做到数据溯源。

金索坤SK-盛析 原子荧光光度计


2019-11-07 16:16:29 530 0

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