大连江申液相色谱仪LC-10P使用说明书

GX液相色谱仪使用说明
型号：LC-10AT 产地 日本岛津 型号： L C - 10A T GX液相色谱仪是日本岛津公司 1996 年的产品， 检测器为可变波长紫外检测 器， 色谱柱为岛津公司的 ODS - C18 。 2. 用途： 用途： GX液相色谱法只要求样品能制成溶液， 不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽， 固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、 离解的和非离解的以及各种分子 量范围的物质。 与试样预处理技术相配合，HPL C 所达到的高分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定 性质上十分相近的物质成为可能， 能够分离复杂相体中的微量成分。 随着固定相的发展， 有 可能在充分保持生化物质活性的条件下完成其分离。由于 HPL C 具有高分辨率、高灵敏 度、速度快、色谱柱可反复利用， 流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食 品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。GX液相色谱仪与结构仪器的联用 是一个重要的发展方向。 3. 测定原理 GX液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。 储液器中的流动相被高压泵打入系统， 样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱 (固定相) 内， 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数， 在两相中作相对运 动时， 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程， 各组分在移动速度上产生较大的差别， 被 分离成单个组分依次从柱内流出， 通过检测器时， 样品浓度被转换成电信号传送到记录 仪，数据以图谱形式打印出来。 4. 使用方法 4.1 系统组成：本系统由 1 个 LC-10ATvp 溶剂输送泵、Rheodyne 7725i 手动进样阀、 SPD-10Avp 紫外-可见检测器、色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机、不间 断电源等辅助设备。 4.2 准备 4.2.1 准备所需的流动相，用合适的 0.45?m 滤膜过滤，超声波脱气 20min。 4.2.2 根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 4.2.3 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制） ，用合适的 0.45?m 滤膜过滤。 3.2.4 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常，特别注意输液管道内 是否有气泡。 4.3 开机：接通电源，依次开启不间断电源、溶剂输送泵、先将机器预热半小时，这时 的流动相用 85％甲醇溶液（已脱气） ，而且要时刻注意输液管道内是否有气泡，如有气泡 要进行排气。预热半小时后，开启检测器，待检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示 器、主机，Z后打开色谱工作站。 4.4 各种参数设定 4.4.1 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需波长值，按 [Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 4.4.2 流速设定：在输送泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（柱在 线时流速一般不超过 1ml/min） ，按[Enter]键确认。按[CE]键退出。 4.5 更换流动相并排气泡 4.5.1 将输送管道的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶（已排气）中； 4.5.2 逆时针转动泵的排液阀 180 度，打开排液阀； 4.5.3 按泵的[purge]键，pump 指示灯亮，泵大约以 2ml/min 的流速冲洗，3min（可设定） 后自动停止； 4.5.4 将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。 4.5.5 如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 4.5.6 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为 5ml/min，按[pump]键，冲洗 3min 后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定 值。 4.6 平衡系统 4.6.1 按《大连江申色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件，输入实验信 息并设定各项方法参数后，按下“数据收集”页的 [查看基线] 按钮。 4.6.2 等度洗脱方式 4.6.2.1 按输送泵的[pump]键，泵启动，pump 指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系 统，一般Z少需 6 倍柱体积的流动相。 4.6.2.2 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 4.6.2.3 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过 1MPa。如超过则可初步判断为柱 前管路仍有气泡，按 3.5 操作。 4.6.2.4 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移<0.01mV/min，噪声为<0.001mV 时，可认为 系统已达到平衡状态，可以进样。 4.7 测定步骤 4.7.1 计算校正因子 4.7.1.1 用编辑∈实验参数编辑实验参数在编辑实验参数时， 纪录图谱名要按照校正文件名 的格式输入 xxxx0101. 4.7.1.2 用编辑∈积分定量参数对话框，选择单点外标法 4.7.1.3 用编辑∈报告参数对话框编辑好相应的参数，选择校正实验检查框 4.7.1.4 用编辑∈校正∈校正实验参数对话框编辑相应的校正参数及方式， 校正文件名前缀 必须与编辑∈实验参数的文件名前 4 位一致 4.7.1.5 用编辑∈校正编辑定量峰表对话框编辑需要的校正的色谱峰的保留时间、样品名、 每点的含量、峰标志及误差，编辑完成后确认，以后∈校正∈计算校正因子命令利用定量 峰表进行峰的匹配及计算。 4.7.1.6 用∈操作∈数据采集功能进行求校正因子的实验，将标准样品进样，进样前按检测 器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使 其弹起。 4.7.1.7 用∈操作∈峰检测功能对图谱进行峰检测， 完成后用∈操作∈校正∈计算校正因子 及绘制标准曲线。 4.7.2 进样 4.7.2.1 进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一 下 [查看基线] 按钮使其弹起。用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量 4.7.2.2 进行样品分析，用∈操作∈数据采集对样品进行数据采集，并把编辑∈报告参数把 校正文件名填入校正文件名编辑框，然后进测定样。 4.7.2.3 用∈操作∈峰检测， 对采集的色谱峰进行检测， 之后工作站自动装入外标因子文件， 计算出含量。 4.7.2.4 打印报告 用∈打印∈打印分析报告，打印机输出分析报告。 4.8 关机 样品测定结束后，将检测器关机，将输送管道的吸滤器放入装有 85％甲醇溶液（已脱气） 的储液瓶，进行测定系统清洗，半小时后关机。 5. 注意事项 5.1 流动相内有气泡， 关闭泵， 打开泄压阀， 打开 purge 键， 清洗脱气， 气泡不断从过滤器冒 出， 进入流动相， 无论打开 purge 键几次，都无法清除不断产生的气泡。 原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内， 过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团， 阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动 相。 处理过滤器浸泡于 5 %硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于 5 %硝酸 溶液中 12～36 小时， 轻轻震荡几次， 再将过滤器用纯水清洗几次， 打开泄压阀， 打开 p urge 键，清洗脱气， 如仍有气泡不断从过滤器冒出， 继续将过滤器浸泡于 5 %硝酸溶液中， 如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏， 流动相可以 流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至 1. 0～3. 0ml/ min ，纯水冲洗过滤器 1 小 时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。 5.2 柱压高原因(1) 缓冲液盐分如(乙酸铵等) 沉积于柱内; (2) 样品污染沉积。 处理对于diyi种情况先用 40～50 ℃的纯水，低速正向冲洗柱子， 待柱压逐渐下降后， 相 应提高流速冲洗， 柱压大幅度下降后， 用常温纯水冲洗， 之后用纯甲醇冲洗柱子 30 分钟; 对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的 C18 柱，和纯水反向冲洗柱子， 然后换成甲醇冲 洗， 接着用甲醇+ 异丙醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) ， 再用 换成甲醇冲洗， 然后用纯水冲洗， Z后甲醇冲洗正向冲洗柱子 30 分钟以上。 5.3 既无压力指示，又无液体流过 原因(1) 泵密封垫圈磨损; (2) 大量气泡进入泵体。 处理对于diyi种情况，更换密封垫圈;对于第二种情况，在泵作用的同时， 用一个 50ml 的 玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。 5.4 压力波动大，流量不稳定. 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。 处理工作中注意观察流动相的量， 保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动 相要充分脱气[2 >。 如为单向阀和阀座之间夹有异物， 拆下单向阀， 放入盛有丙酮的烧杯用 超声波清洗. 5.5 出峰不佳，峰分叉。 原因(1) 色谱柱被污染; (2) 柱头填料塌陷。 处理对于diyi种情况， 先用纯水反向冲洗柱子， 然后换成甲醇冲洗， 接着用甲醇+ 异丙 醇(4 + 6) 冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定) ， 再换成甲醇冲洗， 然后用纯 水冲洗，Z后甲醇冲洗正向冲洗柱子 30 分钟以上。 如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情 况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料) ， 装入新填料， 滴一滴甲醇， 填料下陷， 再填， 用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧， 再填平， 滴甲醇， 再压紧反复几次， 直至装满填平[2 >。柱头用甲醇冲洗干净， 擦净柱外壁 的填料， 拧紧柱头，用纯甲醇冲洗 30 分钟以上。 5.6 峰面积重复性不佳。 原因(1) 进样阀漏液; (2) 加样针不到位。 处理对于diyi种情况更换进样阀垫圈; 对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶 液后须快速、平稳地从 LOAD 状态转换到 INJ EC T 状态，以保证进样量的准确。日常工 作中， 液相色谱仪的保养非常重要， 如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中， 储液 器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液， 每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲 洗干净，防止无机盐析出或沉积; 样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质， 完全溶解， 尽量减少对色谱柱的污染， 以延长色谱柱的使用寿命， 同时避免注射过浓的样 品溶液， 以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞; 色谱柱作好标记，用于不同分析目的 的色谱柱不要混用等。