植物内生真菌的鉴定方法步骤有哪些

来源鉴定、性状鉴定、显微鉴定及理化鉴定等方法。
（一）来源鉴定法
又称基原鉴定法，是应用植（动、矿）物分类学的知识，对中药的来源进行鉴定，确定其正确的学名，以保证应用品种准确无误。
1．来源鉴定的内容：包括原植（动）物的科名、植（动）物名、拉丁学名、YY部位，矿物药的类、族、矿石名或岩石名。
2．原植物鉴定的步骤：①观察植物形态；②核对文献；③核对标本。
中药的原植物鉴定，除经典分类学方法外，还可使用化学分类学、细胞分类学、数值分类学、DNA分类学方法和技术。
（二）性状鉴定法
就是用眼看、手摸、鼻闻、口尝、水试、火试等十分简便的方法来鉴别药材的外观性状，这些方法积累了丰富的传统鉴别经验，具有简单、易行、迅速的特点。 性状鉴定的内容包括形状、大小、色泽、表面特征、质地、折断面的特征、气、味、水试、火试等。
1． 药材 ：
⑴ 形状 ：药材的形状与YY部位有关，每种药材的形状一般比较固定。
⑵ 大小 ：指药材的长短、粗细（直径）和厚度。
⑶ 色泽 ：药材的颜色与成分有关，颜色是否符合要求，是衡量药材质量好坏的重要因素之一。一般应在自然光下观察药材的颜色，如用两种色调复合描述色泽时，应以后一种色调为主色。
⑷ 表面特征 ：指药材表面是光滑还是粗糙，有无皱纹、皮孔、鳞片、毛茸或其它附属物等。
⑸ 质地 ：指药材的轻重、软硬、坚韧、疏松（或泡松）、致密、黏性、粉性、油润、角质、绵性、柴性等特征。
⑹ 断面特征：包括自然折断面和横切面。
⑺ 气 ：“气”是由于药材含有挥发性物质的缘故，也是药材的重要鉴定特征之一。
⑻ 味：药材的味感是由其所含的化学成分决定的，每种药材的味感是比较固定的。味感也是衡量药材品质的标准之一。
⑼ 水试 ：有些药材放入水中，能产生特殊的现象，如沉浮、溶解情况、颜色、透明度、有无黏性、膨胀度、旋转与否及有无荧光等。
⑽ 火试 ：有些药材用火烧之，能产生特殊的香气或臭气，会有颜色、烟雾、闪光或响声等现象出现，可据此鉴别其真伪甚至优劣。
三）显微鉴定法
是利用显微镜来观察药材的组织构造、细胞形状以及内含物的特征，矿物的光学特性，以及利用显微化学方法，确定细胞壁及细胞内含物的性质或某些品种有效成分在组织中的分布，用以鉴定药材的真伪和纯度甚至品质，以及对中成药是否按规定投料进行鉴定。
1．显微制片方法
包括有横切片或纵切片、表面制片、粉末制片、解离组织片、花粉粒与孢子制片、磨片制片、含粉末药材的制剂显微制片等。
2．植物细胞壁和内含物的鉴别
3．显微测量
目镜测微尺先用镜台测微尺标化，然后在显微镜下测量细胞及细胞内含物的大小。通常是在高倍物镜下进行测量，但欲测量较长的纤维、非腺毛等的长度时，则在低倍物镜下测量，记录Z大值与Z小值。
4．显微常数测定
常见的显微常数主要有用于叶类鉴别的气孔数、气孔指数、栅表比、脉岛数和脉端数等。这些显微常数常因植物种类不同而异，而同种植物则较为恒定，对于叶类、某些带叶的全草类和花类药材的品种鉴定有重要意义。
5．常用封藏试液
⑴ 蒸馏水、稀甘油：适用于观察淀粉粒、油滴、树脂等细胞内含物及细胞壁的颜色。
⑵ 甘油醋酸试液：使淀粉粒不膨胀，特别适宜淀粉粒的观察与显微测量。
⑶ 水合氯醛试液：可使皱缩的细胞膨胀；可溶解多种色素，如叶绿素及树脂、淀粉粒、蛋白质、菊糖、挥发油，而各种晶体不溶解；有清净、透明作用，使细胞、组织透明，便于观察细胞形状和组织构造及细胞内含的各种结晶体。
6．扫描电子显微镜和偏光显微镜的应用
⑴ 扫描电子显微镜：分辨率高，可达3nm，放大倍数一般可达几十万倍，图像富有立体感。
⑵ 偏光显微镜：主要用于观察和分析矿物类中药的光学性质，也可用于研究动物和植物类中药的组织及细胞内含物，如淀粉粒、草酸钙簇晶等。对于透明矿物，一般使用透射光源的偏光显微镜；对于不透明矿物则使用放射光源的偏光显微镜。
（四）理化鉴定法
1．物理常数的测定
包括相对密度、旋光度、折光率、硬度、黏稠度、沸点、凝固点、熔点等的测定。这对挥发油类、油脂类、树脂类、液体类药（如蜂蜜等）和加工品类（如阿胶等）药材的真实性和纯度的鉴定，具有特别重要的意义。
2．一般理化鉴别
⑴ 化学定性分析：利用药材中的化学成分能与某些试剂产生特殊的气味、颜色、沉淀或结晶等反应来鉴别中药的真伪。
⑵ 微量升华：利用中药中所含的某些成分，在一定温度下能升华的性质获得升华物，在显微镜下观察其结晶性状、色泽，或取升华物加试液观察反应。
⑶ 荧光分析：利用中药中所含的某些化学成分在紫外光或常光下能产生一定颜色的荧光的性质进行鉴别。紫外光灯的波长为365nm，如用短波（254～265nm）时应加以说明。
⑷ 显微化学分析：将药材的切片、粉末或浸出物等置于载玻片上，加某些化学试剂后产生沉淀或结晶，在显微镜下观察其形状和颜色进行鉴别。利用显微和化学方法确定中药有效成分在中药组织构造中的部位，称为显微化学定位试验。
⑸ 泡沫指数和溶血指数：利用皂苷的水溶液振摇后能产生持久性的泡沫和溶解红血球的性质，可测定含皂苷类成分药材的泡沫指数或溶血指数作为质量指标。
3．检查
⑴ 水分测定法：2005年版《ZG药典》水分测定法有四种，即烘干法、甲苯法、减压干燥法和气相色谱法。
⑵ 灰分测定法：2005年版《ZG药典》灰分测定法包括总灰分测定法和酸不溶性灰分测定法。
⑶ 膨胀度的测定：膨胀度是药品膨胀性质的指标，系指按干燥品计算，每1g药品在水或其它规定的溶剂中，在一定的时间与温度条件下膨胀后所占有的体积（ml）。主要用于含黏液质、胶质和半纤维素类的天然药品。
⑷ 酸败度：是指油脂或含油脂的种子类药材，在贮藏过程中发生复杂的化学变化，产生游离脂肪酸、过氧化物和低分子醛、酮类分解产物，因而出现臭味，影响药材的感观性质和内在质量。
⑸ 色度检查：利用比色鉴别法检查药材在贮藏过程中有色杂质的限量，如白术。
⑹ 有害物质的检查：中药中的有害物质主要有内源性的有害物质和外源性的有害物质。
①内源性的有害物质：
②外源性有害物质：
4．色谱法
⑴ 薄层色谱法：是用于定性鉴别Z多的色谱法之一。
⑵ GX液相色谱法
⑶ 气相色谱法：适用于含挥发油及其它挥发性组分的中药及中成药的分析。
⑷ 蛋白电泳色谱法：用于动物药、果实种子类及根茎类等含蛋白质及氨基酸的药材的真伪鉴别。
⑸ GX毛细管电泳
5．分光光度法
包括紫外－可见分光光度法、红外分光光度法和原子吸收分光光度法。常用波长范围为：200～400nm的紫外光区；400～760nm的可见光区；2.5～25um（按波数计为4000～400cm－1）的红外光区。
6．色谱－光谱联用仪分析法
7．浸出物测定
对某些中药的有效成分尚未清楚或尚无精确定量方法的中药，一般可根据已知成分的溶解性质选用溶剂进行浸出物的测定。通常选用水、一定浓度的乙醇（或甲醇）、作浸出物测定。有冷浸法和热浸法。测定前供试品需粉碎，使能过二号筛。
8．含量测定
⑴ 含量测定方法：既有经典分析方法（容量法、重量法等）又有现代仪器分析法（如紫外－可见分光光度法、气相色谱法、薄层扫描法、GX液相法等）。
⑵ 挥发油含量测定方法有两种：①甲法适用于测定相对密度在1.0以下的挥发油；②乙法适用于测定相对密度在1.0以上的挥发油。
（五）新技术和新方法简介
1．DNA分子遗传标记技术
2．中药指纹图谱鉴定技术