流式细胞分析中细胞免疫阳性表达率是什么意思

我Z近做了EGFP阳性细胞的FACS，分选过程中显示阳性率约为30%，但一管约3×106的细胞Z后只分选到了约5万个阳性细胞，更要命的是，从收集管中的细胞离心之后居然什么都看不到，把转速加大至10000rpm也还是同样结果。请问这是怎么回事哪？另外一个问题是，做流式时是根据什么来设门的，有没有具体的参数？回复提一点粗浅的建议1、分选过程中显示阳性率约为30%，但一管约3×106的细胞Z后只分选到了约5万个阳性细胞细胞是否黏附成团？2、从收集管中的细胞离心之后居然什么都看不到，把转速加大至10000rpm也还是同样结果5万个细胞肉眼是观察不到的，10000rpm会损伤细胞3、做流式时是根据什么来设门的流式设门根据要求而定，一般会设FS（前向角，反映细胞大小），SS（侧向角，反映细胞形态结构复杂性），以及标记抗体对应的荧光通道等参数，根据要求进行组合，达到目的就行