如何验证目的基因和内参基因的扩增效率一致

如何验证目的基因和内参基因的扩增效率一致
内参基因和待测基因本来就不一样。

扩增曲线和溶解曲线不是一个概念。扩增曲线是每扩增一个循环，测量一次荧光强度。这个由底物的浓度和扩增效率所决定。目的基因和内参的浓度肯定不同，而且引物的序列不同，扩增效率也可能不一样，所以两者的曲线肯定有可能不一样。

SyberGreen PCR，溶解曲线是PCR完成以后，对产物逐步加温，测量荧光强度的变化，而不是荧光强度本身。DNA双链在温度达到TM附近时，发生大量的解离，荧光强度的变化Z大，出现峰值。这个峰值的位置是由PCR产物的TM值所决定的，和PCR产物的序列，GC比例有关。所以内参基因和目的基因的峰值肯定是不一样的。