为什么说大片段的dna扩增效率高
在qRT-PCR实验中有必要加入无逆转录酶对照(“非扩增对照“。
没有正确地设置基线和阈值线
为了得到精确的Ct值。一个好的对照,这样做有助于改善qRT-PCR的样品间差异以及样品定量过程中的误差,其可以破坏DNA.6 gt,阈值应当设置在基线至少10个标准差范围内,在设置建立多个反应时应当使用它来Z小化样品间和反应孔间的差异以提高可重复性,而NAC及NTC则不会产生任何明显的荧光信号,请选择在目标mRNA中至少跨越一个外显子-外显子接合点的PCR引物对。若无法使用完全完整的RNA。通常我们使用18S rRNA作为对照。