DHFR－MTX基因扩增原理

　　DHFR缺陷型的细胞，不含二氢叶酸还原酶基因，不能合成核酸，必须在含有HT的培养基里生长。
　　当转染的目的基因连有dhfr基因时，阳性细胞也就获得了dhfr基因。MTX是二氢叶酸还原酶的YZ剂，可阻碍其作用。当细胞培养基内含有MTX时，二氢叶酸还原酶被YZ，通过反馈调节。使得该基因自我扩增，连带其上下又100-1000kb的基因都会扩增。如此目的基因也得到扩增，即可提高目的蛋白的表达量。

由于CHO-dhfr-细胞自身缺失二氢叶酸还原酶（dhfr），无法自身合成四氢叶酸，所以必须在添加了次黄嘌呤（hypoxanthine）、胸腺嘧啶（Thymidine）和甘氨酸的培养液中才能得以存活。而通过目的基因与dhfr基因共转染，不仅得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆，更为重要的是由于dhfr可被叶酸类似物MTX所YZ，在MTX浓度选择压力下，dhfr基因必须扩增到很多的拷贝数才能生存，从而得到抗MTX细胞系；又由于与dhfr基因共转染的目的基因倾向于同它一起整合到细胞染色体上的同一区域，所以编码外源重组蛋白的序列片段也随着dhfr基因的扩增而扩增，我们就得到了能大量表达外源蛋白的细胞克隆，这在基因工程抗体及各种基因工程蛋白的表达中是可行度很高的一种措施。