DNA粗提取与鉴定’实验中,用甲基绿代替二苯胺鉴定"
本科修读生物专业的同学一定不会忘记“DNA粗提取与鉴定”、“利用甲基绿-吡罗红观察DNA和RNA在细胞中的分布”两个实验。这两个实验的原理都很简单:DNA与二苯胺试剂仪器加热可以产生蓝色化合物;甲基绿可以使DNA呈绿色。所以在粗看标题中的那句陈述时,大多数学生一定会觉得这是正确的,因为这两种试剂都能使DNA产生颜色反应。 而标准答案却给这句话判了死刑,这令众多学生不解(其实Z初我也有些不解)。想要弄清楚这句话到底错在哪里,还是必须先复习一下“DNA粗提取与鉴定”、“观察DNA和RNA在细胞中的分布”两个实验的原理以及过程。 首先来说说看“DNA的粗提取与鉴定”。根据DNA在0.14 mol/ L的NaCl溶液中溶解度Z低的原理,可以析出NaCl溶液中的DNA,再利用DNA不溶于酒精溶液而细胞中某些物质可以溶于酒精的原理,进一步提取出杂志较少的DNA。Z后将缠绕在玻璃棒上的白色丝状物(DNA易吸附于玻璃容器上)加入含0.015 mol/ L的NaCl溶液中,加入二苯胺试剂,沸水浴后可观察到溶液呈蓝色。 再来比较“观察DNA和RNA在细胞中的分布”。主要是运用了甲基绿与吡罗红分别对DNA与RNA的亲和力不同的原理,来观察DNA(与甲基绿结合呈绿色)与RNA(与吡罗红结合呈红色)在细胞中的分布。 到这里为止依然看不出为什么不能用甲基绿替代二苯胺吗?提示一下,关键就在于这两个实验中
使用试剂测定的方法不同。有些眉目了吗?“观察DNA分布”里,我们是将待观察物质置于载玻片上,使用甲基绿与吡罗红染色后,吸去多余染色剂再观察;而在“DNA鉴定”里,我们能够将二苯胺直接加入含DNA的溶液中加热观察。为什么不能使用甲基绿代替二苯胺,答案应该呼之欲出了。 不同于二苯胺溶液的无色,甲基绿多为淡绿色粉末,
溶于水后呈蓝绿色,如果我们也将它直接加入DNA溶液中来鉴定DNA的存在,无疑是不可得出结论的。因为这整瓶溶液都会呈现绿色,即使DNA被染色,这“万绿丛中一点绿”也是观察不出来的。 这就是题目的陷阱。