1. 取1颗小鼠粪便,放入1.5 EP管
2. 配Tail digestion buffer:
500 ul digestion buffer + 5ul 蛋白酶K(简称PK, 10mg/ml,现用现加),每管分装500 ul
3. 将加好buffer的管子放入55C的水浴中,消化过夜
4.取出EP管,用劲将消化好的粪便摇匀
5.抽提:每管加入500 ul 酚/氯仿(
6.混匀,离心,12,000rpm,10~12min
7.转移200 ul上清至新的标记好的1.5 EP管内。
8.沉淀:加入400 ul 无水乙醇上下颠倒混匀,此时应可看到白色丝状的DNA;
9.离心,12,000rpm,5 min;
10.弃去上清;
11.加入400 ul 70%乙醇;
12.离心,12,000rpm,5 min;
13.弃去上清;
14.晾干,>30 min
15. 加入200 ul TE缓冲液,可放入37C助溶;
16.短期4C保存,长期-20C保存。
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