梯度洗脱装置分两种:
高压梯度:用两台高压输液泵将两种溶剂输入
低压梯度:在常压下将两种溶剂(或多元溶剂)混合,然后用高压输液泵将流动相输入到色谱柱中。
梯度洗脱可提高分离度、缩短分离时间、降低Z小检测量和提高分离精度。
但在使用中,梯度洗脱也有许多与等度洗脱不同的地方需要注意。
梯度洗脱时应注意:
1、注意各溶剂间的互溶性。
2、对溶剂的纯度要求更高(影响重现性)。
3、注意梯度变化时系统压力的变化,防止超出限度。
4、梯度结束后,用初始流动相冲洗,使柱子平衡一段时间(再生),使系统回复到初始状态。(梯度周期)
5、低压梯度要注意脱气,混合后容易产生气泡。
6、容易出现鬼峰,应作空白试验。
7、梯度选择时尽量几相之间相变化要小,否则不易平衡。
8、梯度洗脱应使用对流动相组成变化不敏感的选择性检测器(如紫外吸收检测器或荧光检测器),而不能使用对流动相组成变化敏感的通用型检测器(如示差折光检测器)。
9、要注意水相中盐的浓度,防止在有机相提升过程中盐的析出。