为什么细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前Z好先去除红细胞
1. 如果靶序列>5kb,则需进行脱嘌呤处理。
(1) 把凝胶浸在0.25mol/L HCl中,室温轻轻晃动,直到溴酚蓝从蓝变黄。
注意:处理人类基因组DNA≤10分钟;处理植物基因组DNA≤20分钟。
(2) 把凝胶浸在灭菌双蒸水中
2. 如果靶序列<5kb,则直接进行下面的步骤
(1) 把凝胶浸在变性液(0.5mol/L NaOH,1.5mol/L NaCl)中,室温2×15分钟,轻轻晃动。
(2) 把凝胶浸在灭菌双蒸水中
(3) 把凝胶浸在中和液中(0.5mol/L Tris-HCl,pH7.5,1.5mol/L NaCl),室温2×15分钟。
(4) 在20×SSC中平衡凝胶至少10分钟。