微生物挑战性试验怎么做？

防腐体系效能挑战实验

1、CTFA推荐的防腐单次挑战试验
CTFA推荐的经典的为期28天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后一次性接入若干种类、一定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的KJ效果。
2、试验仪器
恒温培养箱、显微镜、灭菌平皿：直径为9cm、pH计、高压灭菌锅、酒精灯、锥形烧瓶、量筒、灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml;试管。
3、培养基和试剂
生理盐水、SCDLP液体培养基、卵磷脂、吐温80-营养培养基。
4、挑战用微生物
提取菌珠：杂菌由实验室从污染产品中得出菌种。
菌种培养：实验前，将各菌种接种于合适的培养基中，于37℃（细菌）培养箱中培养。细菌培养48小时，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中制成一定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。
5、微生物挑战实验
称取8种化妆品基质样品各100克，加入灭菌的容器内，加入混合细菌悬液，充分混匀。每克样品含细菌量为5×106CFU/克或CFU/ml。然后置于28℃下。在接菌的0、7、14、21、28天取样分析：准确称取10克样品，加到含有玻璃小球和90ml灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀，此悬液为1：10稀释液；然后再用生理盐水按1：10依次稀释。按平板倾注法计数样品中含菌量细菌培养37℃下48小时。
6、判定标准
1、第28天时，样品中含细菌>103cfu/g(ml)，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到YZ微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。
2、第28天时，样品中含细菌在102cfu/g(ml)-103cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能。
3、第28天，样品中含细菌在10cfu/g(ml)-102cfu/g(ml)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。
4、从第7天起，样品中的细菌<10cfu/g(ml)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。